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InGex.com是Ingex有限责任公司的所在地，也是TGIRT™-III独立酶和TGIRT™模板切换RNA-seq试剂盒的*授权销售商。

TGIRT™ Template-Switching RNA-seq Kit (TGIRTKit25)

试剂盒内容：

• 该试剂盒包括该TGIRT ^® -III酶预混合与用于模板切换，二硫苏糖醇（DTT），修饰的RNA / DNA异源双链寡核苷酸和反应缓冲液进行TGIRT ^®对于Illumina的RNA-SEQ分析模板交换反应。^7,8该试剂盒可以使用无缝连接到cDNA 5'末端的RNA-seq转录子合成RNA模板的cDNA拷贝。对于RNA-seq文库构建，在PCR扩增前，必须使用耐热的5'AppDNA / RNA连接酶（New England BioLabs; M0319S或M0319L）将cDNA第二个RNA-seq 接头（另购）连接到cDNA的3'末端。

酶性质和新型活性：

• 比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性，持续性和保真度，允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端cDNA合成。^14,5,6,7,8

• 新的端对端模板切换活动，其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR适配器，并且不再需要单独的RNA 3' - 衔接子连接步骤。¹这种模板切换活动大大促进了链特异性RNA-seq文库的构建，其偏倚偏差小于使用随机六聚体引物的方法，或者使用RNA连接酶进行衔接连接。^1,4,7,8

酶的建议用途：

1. 综合股特异性转录组分析。
2. 全细胞，外来体，血浆和其他无细胞RNA的RNA-seq 。
3. miRNA和其他小型非编码RNA的分析。
4. RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析。

工具包的优点：

1. 综合转录组分析比传统方法更少的偏差。

   根据zui近的出版物，核糖核酸裂解的片段化通用人参考RNA样品的TGIRT-seq概括了与非链特异性TruSeq v2相比较的人转录本和尖峰的相对丰度，优于链特异性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3显着更强的链特异性，并消除TruSeq固有的随机六聚体启动的取样偏差。TGIRT®-seq显示更均匀的5'至3'基因覆盖，并识别比TruSeq更多的剪接点。TGIRT®-seq可以在与结构化小ncRNA（包括tRNA）相同的RNA序列中同时进行mRNA和mRNA的分析，这些tRNA基本上不存在于TruSeq数据集中。⁸

2. 全细胞，外来体，血浆和其他细胞外RNA的RNA-seq。

   快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量RNA（低ng范围）; 全面的转录谱，包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA，包括tRNAs，pre-miRNAs和其他结构化小ncRNA的全长读数; 较常规方法较少的偏差和较大的链特异性。^7,8

3. 比逆转录病毒RT更高的持续性和链置换活性。

   使得可以获得tRNA和其他结构化的小ncRNA的全长的端到端cDNA，这些cDNA对于逆转录病毒RT是难治的。^4-7

4. 通过TGIRT®模板切换的RNA-seq文库构建，如miRNA分析，RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析等方法。

   快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量RNA（低ng范围）; 不需要RNA连接酶，通过在该过程中具有较少的步骤，偏倚较小并且更有效。

参考文献：

1. Mohr，S.，Ghanem，E.，Smith，W.，Sheeter，D.，Qin，Y.，King，O.，Polioudakis，D.，Iyer，VR，Hunicke-Smith，S.Swamy， Kuersten，S.and Lambowitz，AM Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next generation RNA sequencing。RNA 19，958-970，2013。
2. Collins，K。和Nilsen，T. Enzyme engineering through evolution：热稳定重组II内含子逆转录酶为RNA研究和生物技术提供了新的工具。RNA 19,1017-1018,2013。
3. Enyeart，PJ，Mohr，G.，Ellington，AD和Lambowitz AM移动组II内含子及其逆转录酶的生物技术应用：基因靶向，RNA-seq和非编码RNA分析。 DNA 5：2，2014。
4. Katibah，GE，Qin，Y.，Sidote，DJ，Yao，J.，Lambowitz，AM和Collins，K.Ban and adaptability RNA structure recognition by the human interferon-induced tetratricopeptide repeat protein IFIT5。PROC。国家科。科学院。科学。，USA，  111，12025-12030，2014。  
5. Shen，PS，Park，J.，Qin，Y.，Li，X.，Parsawar，K.，Larson，MH，Cox，J.，Chen，Y.，Lambowitz，AM，Weissman，JS，Brandman，O. ，和Frost，A.Rqc2p和60S核糖体亚基介导新生链的mRNA非依赖性伸长。科学347，75-78，2015年。
6. Zheng，G.，Qin，Q.，Clark，WC，Yi，C.，He，C.，and Lambowitz，AMand Pan，T.Efficient and quantitative high-throughput transfer RNA sequencing。Nature Methods，12,835-837，2015。
7. Qin，Y。，Yao，J。，Wu，D。，Nottingham，R.，Mohr，S，Hunicke-Smith，S.，Lambowitz，AM，High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse酶。RNA 22，111-128，2016。
8. Nottingham，RM，Wu，DC，Qin，Y.，Yao，J.，Hunicke-Smith，S.，and Lambowitz，AM RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase。RNA，22,597-613，2016。

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