上海起发为System Biosciences特约经销商，System Biosciences,简称SBI，美国加州湾区新成立的生技公司，致力于*、创新生物技术之开发，以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。 现阶段研发重心为RNA干扰（RNAi）研究之相关工具。 System Biosciences (SBI) 致力于开发*、革新的技术，为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具。SBI 是专业的慢病毒产品公司，提供基于慢病毒的所有相关产品、质粒、试剂盒及相关配套试剂和慢病毒延伸产品如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。
SBI CAS720A-KIT说明书
品牌：System Biosciences
货号：CAS720A-KIT
增强您的一体化Cas9 SmartNuclease质粒与多路复用gRNA传递
通过将CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA一体化Cas9 SmartNuclease TM质粒与Multiplex gRNA克隆试剂盒相结合，轻松提高功能。总之，这两种产品可以实现更广泛的需要多种gRNA的复杂基因组编辑项目。
您可以获得CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA All-in-one Cas9 SmartNuclease质粒的所有优点：
结合Multiplex gRNA克隆试剂盒的优点：
正如我们所有的Cas9交付选项一样，CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA质粒在功能上得到了验证，并得到了我们的专家团队的支持 - 如果您有基因组工程问题，只需通过电子邮件tech @ systembio发送问。 com。
为什么建议使用人力资源定位向量
尽管单独由Cas9引起的DSB可导致基因敲除，但SBI建议使用HR靶向载体（也称为HR供体载体）以实现更有效和的突变。人力资源捐助者可以提供正面或负面选择的要素，以确保更容易识别成功的突变事件。此外，HR供体可以包含高达6-8 kb的开放阅读框用于基因敲入或标记，并且当5'或3'同源臂中包含小突变时，可以进行特定的靶向基因编辑。
使用此表格选择适合您的CRISPR / Cas9产品：
对于此应用程序 | 使用这些产品 | |
修改生物 | 使用这些产品 | 使用这些产品 |
·基因标记 ·转基因生物的产生 ·模型生物工程 | 创造转基因动物 | ·注射Cas9 mRNA＆ ·gRNA合成试剂盒 ·纯化的Cas9蛋白 |
动物模型中的体内基因组编辑 | ·AAV-Cas9载体 ·纯化的Cas9蛋白 | |
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修改细胞系 |
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·稳定的KO，KI和基因组 ·编辑体细胞 ·转基因细胞系的生成 ·基于细胞的疾病模型 | 可转染的细胞 | ·Cas9质粒 ·纯化的Cas9蛋白 |
·AAV-Cas9 Vect难以转染细胞系， ·主要细胞 ·造血细胞 ·干细胞 ·Lenti-Cas9系统 | ·AAV-Cas9载体 ·Lenti-Cas9系统 | |
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筛选 |
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·全基因组调查 ·gRNA库屏幕 ·功能屏幕 | 所有应用都需要 稳定的Cas9过表达 | ·Lenti-Cas9系统 ·AAVS1安全港Cas9 ·敲入系统 ·纯化的Cas9蛋白 |
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临床前应用 |
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·非目标事件是受关注的问题 | 所有应用 | ·Cas9切割片，提供所有交付格式 ·纯化的Cas9蛋白 |
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多变量同时工程 |
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| 所有应用 | ·多重gRNA克隆试剂盒，兼容所有Cas9递送选项 |
使用SBI的一体化Cas9 SmartNuclease质粒和Mulitplex gRNA克隆试剂盒
工作流程一目了然
图1. Multiplex gRNA克隆试剂盒工作流程。
使用Multiplex gRNA克隆试剂盒准备您的多重gRNA插入片段（图1）
PrecisionX Multiplex gRNA克隆试剂盒提供H1和U6启动子区域，可轻松构建多个gRNA盒（图1）。在步骤1中，将含有所需gRNA（由用户设计）和脚手架 - 启动子区段（来自试剂盒）的重叠末端的引物在PCR反应中合并以产生含有两种gRNA的PCR扩增子。在步骤2中，将PCR扩增子与融合反应混合物一起与用于无缝构建的线性化表达载体组合。
用CRISPR / Cas9进行基因组工程
有关使用CRISPR / Cas9技术进行基因组工程的一般指导，请查看我们的CRISPR / Cas9教程以及以下应用笔记：
CRISPR / Cas9基因敲除应用简报（PDF）»
CRISPR / Cas9基因编辑应用简报（PDF）»
CRISPR / Cas9基因标签应用简报（PDF）»
CRISPR / Cas9基础
通过仔细选择靶序列和设计供体质粒进行同源
重组，您可以使用CRISPR / Cas9实现且高度靶向的基因组修饰。
系统
Cas9蛋白质 - 指导RNA（gRNA）指导位点特异性双链DNA切割，与目标DNA中的原型衔接子基序（PAM）相邻。
引导Cas9切割靶基因组中的同源区域的gRNA- RNA序列。仅当gRNA同源性与PAM相邻时才有效切割。
PAM- prototospacer衔接子基序NGG是目标DNA序列，如果指向gRNA，spCas9将从上游切除。
工作流程一目了然
设计：选择gRNA和HR供体质粒。选择gRNA位点并设计供
体质粒决定同源重组事件是否导致敲除，
敲入，编辑或标记。
构建：将gRNA克隆到一体化Cas9载体中。将5'和3'同源臂克隆到HR
供体质粒中。如果创建基因敲入，将所需基因克隆到HR供体中。
共转染或CO-INJECT：介绍Cas9，gRNA和HR捐赠者进入靶细胞
使用共转染质粒，共转导为慢病毒，或共注射的mRNA。
选择/屏幕：选择或筛选突变体并验证。
VALIDATE：基因型或序列推定的突变体，以验证单个或双等位基因转化。
在多个基因组位置同时进行编辑
请注意，本研究使用略有不同的All-in-One Cas9 SmartNuclease质粒设计，但预期结果相似。
图2. Multiplex gRNA克隆试剂盒可以有效地提供四种gRNA。 （A）我们使用了使用Multilplex gRNA克隆试剂盒和All-in-one Cas9 SmartNickase载体创建的四重gRNA，以从具有稳定整合的CMV的细胞系中去除（B） 1260bp的GFP-T2A-RFP区段-GFP-T2A-RFP表达盒。我们将这四种gRNA克隆到Cas9 SmartNickase载体（EF1Nickase-H1-gRNA）中以指导两个双切口事件 - 一个在GFP的5'末端，另一个在RFP基因的3'末端。（C）使用仅在GFP和RFP基因外部的引物进行的PCR测定在不存在SmartNickase载体（泳道1）的情况下产生1600bp片段，并且在存在Cas9SmartNickase-4gRNA构建体（泳道2）的情况下产生340bp片段，证明SmartNickase介导的配对双切口和GFP-T2A-RFP基因组缺失的效率。（D） GFP和RFP活性的缺失也可以在功能测定中看到，通过降低GFP和RFP荧光。
上海起发实验试剂有限公司是专业从事生物技术产品销售的高科技企业，是国内生物试剂、仪器、消耗品领域的企业之一。起发公司自成立以来，连续2年高速成长。公司的发展目标是建成专业从事生物技术产品销售、生产与开发的公司。
上海起发实验试剂有限公司是实验试剂一站式采购服务商
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7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发，欢迎合作。
