myPOLS Biotec正在开发新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的应用,例如个性化医疗,病原体检测,DNA和RNA诊断,法医学等等。
我们的研发活动包括:
后但并非不重要:我们所有的酶和混合物都是在康斯坦茨内部生产的,并经过常规测试,符合高质量标准。
myPOLS Biotec是一家来自康斯坦茨大学的生物技术公司,来自Andreas Marx教授的研究小组。凭借我们在高通量DNA聚合酶设计方面的专业知识,我们为您的应用定制酶。
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
#6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500次反应á25μl 5 x 1.25毫升 |
#6201S | Volcano3G RT-PCR探针2x Master Mix(+ ROX) | 100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
#6301S | Volcano3G RT-PCR探针2x Master Mix(+ GreenDye) | 100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
#6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix(+ GreenDye,+ ROX) | 100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
包含所有必需的组分,包括dNTP和优化的反应缓冲液,可在所有标准PCR循环仪中实现成功可靠的实时qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我们的*表现,热启动配方,工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物组成。该混合物被设计成适合多重PCR,病原体检测qPCR和各种基于探针的DNA和RNA靶标的qPCR。
包含的Volcano3G DNA聚合酶是一种工程化的,极其热稳定的逆转录酶和组合的DNA聚合酶,通过定向的人工进化获得。基于适体的DNA聚合酶的热启动制剂防止错误扩增。高于50°-55°C的温度会使适体的二级结构熔化并使聚合酶释放。
应用
典型的RT-PCR方案
步 | 温度 | 时间 |
初始变性步骤 | 80℃下 | 60秒 |
逆转录步骤* | 50℃下 | 600秒 |
PCR循环: |
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变性 | 95℃ | 10秒 |
退火/延伸** | 各种* | 50秒(35-50周期) |
可以使用两步法和三步法PCR方案。
* = Volcano3G DNA聚合酶允许直接来自RNA模板的“零步”RT-PCR(没有等温逆转录步骤),因为逆转录也在循环PCR延伸步骤期间与DNA扩增同时发生。因此,逆转录步骤是任选的,并且在某些情况下可以省略。
** =通过运行温度梯度理想地建立新的RT-PCR,以便找到每个引物对的*逆转录/退火/延伸温度。引物的退火温度受其核酸序列和反应缓冲液组成(盐和pH)的强烈影响。
通常,Volcano3G DNA聚合酶是*热稳定的,并且在55-95°C之间活跃。
反应设置
使用的实验建议:
在退火/延伸步骤中使用温度梯度进行PCR,以找到测定的宜温度。
大多数RT-PCR分析在短时间80℃(1分钟)变性步骤和50-55℃(10分钟)的逆转录步骤以及标准PCR循环条件下都能很好地起作用。
建议的反应设置
零件 | 卷 | 终浓度 |
引物前移(10μM) | 1.0μl | 500 nM(50-1000 nM) |
引物反向(10μM) | 1.0μl | 500 nM(50-1000 nM) |
探针(10μM) | xμl | 50 - 1000 nM |
Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix | 10μl | 1X |
模板/样品提取物* | yμl |
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不含核酸酶的水 | 总反应体积高达20μl |
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* =推荐的模板浓度在0.004ng /μl-0.1μg/μl(总RNA或基因组DNA)之间。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。
RT-PCR活性:测试Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在实时PCR循环仪中从人总RNA提取物扩增151bp片段(HPRT1 mRNA),并将其显示为单个扩增产物。
DNA聚合酶活性:使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano3G DNA聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
酶浓度通过蛋白质特异性染色确定。有关批次特定浓度,请通过info@mypols.de查询更多信息。
本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。
通过以等分试样存储来小化冻融循环的次数。对于日常使用,我们建议将等分试样保持在4°C。
Volcano3G来自Taq DNA聚合酶,因此它没有任何RNase-H活性。在循环PCR延伸步骤期间,逆转录与DNA扩增同时发生。
然而,Volcano3G具有核酸酶结构域作为Taq野生型酶,可用于基于水解的实时PCR。
货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
8100S | Volcano2G DNA聚合酶 | 250 U,5U /μl,50μl | mypols |
8100M | Volcano2G DNA聚合酶 | 1000U,5U /μl,200μl | mypols |
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500 reactions á 25 µl | mypols |
5 x 1.25 ml | mypols | ||
6201S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6301S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols |
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