linktech CPR II说明书

linktech CPR II说明书

化学磷酸化是酶法（使用T4多核苷酸激酶和ATP）的成本有效的替代方法，允许有效引入末端磷酸基团。含有5'-磷酸基团的寡核苷酸具有多种应用，通常广泛地用作将一种寡聚物连接到另一种寡核苷酸（例如作为连接子和衔接子）的方法，用于克隆，基因构建和连接。这仍然是常见的基因合成方法。然而，3'-磷酸化用于阻断酶活性。例如，这是一种有效且常用的PCR阻断技术。

使用磷酸盐-ON（2101）（也称为化学磷酸化试剂（CPR））常规地实现寡核苷酸上5'末端的磷酸化，其产率高于使用激酶。除了其固有的便利性之外，CPR还具有优于酶促方法的优势，以允许由于DMTr保护基的存在而确定磷酸化效率。但是，三苯甲基不能用作纯化手柄。在氢氧化铵脱保护过程中，它与磺酰基乙基一起被消除以产生5'-磷酸。2101也可以在3'末端使用，通过添加到任何支持物（例如dT柱）中掺入3'-磷酸。这对于标记较高孔的长寡核苷酸特别有用
没有用于改性的胶料树脂。正是出于这个原因，我们推出了3000Å​​磷酸盐载体。该技术不于磷酸盐改性，因为任何改性亚磷酰胺都可以加入到磷酸盐-ON-T中。在这种情况下，寡核苷酸将在3'末端用“修饰剂 - 磷酸酯-3'”终止。

另一种磷酸化试剂，称为CPR II（2110），已由芬兰图尔库大学的研究人员描述。使用该产物，常规的氢氧化铵裂解产生用DMTr-醚在5'-磷酸保护的寡核苷酸。在该阶段，通过例如RP-HPLC或柱纯化，可以容易地将寡核苷酸与截短的杂质分离。然后通过含水酸除去DMTr-基团并进行简单的氢氧化铵处理，得到5'-磷酸酯。或者，后偶联的产率可以通过寡核苷酸的脱三苯甲基化来量化，同时仍然在载体上。然后去保护导致5'-磷酸化的寡核苷酸。该CPR II试剂已经进一步精制（通过用乙酯代替甲基酰胺）来提供产物，solidCPR ^TM（2127，也称为CPR IIa），具有CPR II的所有优点，同时也是一种稳定的固体，可以轻松称量，处理和溶解（2101和2110都是粘性玻璃）。该产品还允许选择DMT ON纯化。尽管2101可用于3'-磷酸化，但3'-磷酸SynBase ^TM CPG 1000/110和3000/110（2279和2398）允许直接制备具有3'-磷酸基团的寡核苷酸。2127或2110不能用于3'-磷酸化，因为DMTr保护的OH需要释放磷酸基团。

2127中甲基酰胺的存在保护了β-消除反应的修饰，直到脱保护过程中的碱水解。因此，这可以与Fmoc或乙酰丙酰基保护的支化单体（例如2150）结合使用，直到脱保护步骤直至形成磷酸酯部分。2101不受β-消除保护，并且在分支点的去保护期间将形成磷酸酯部分。因此，如果在3'末端使用它，它将从支持物上切割寡核苷酸（如2279/2389那样）。

Chemical Phosphorylation

CPR II

3- [2-（4,4'-二甲氧基三苯甲基氧基）-2,2'-二羧基乙基 - 丙基 - （2-氰基乙基） - （N，N-二异丙基） - 亚磷酰胺

• 产品编号： 2110
• 分子式： C ₃₉ H ₅₁ N ₂ O ₉ P.
• 配方重量： 722.82
• 单重： 79.98