€805.00
酶免疫测定法测定大肠杆菌 BL21（DE3）细胞系中的HCP 。
起动装置为客户提供了所有必要的组件，可以快速，轻松地为特定过程选择合适的套件类型（A或D）。
入门套件包括四个完整的即用型套件：
1x A型，1x D型
每种套件类型包含：
1预期用途
提供的Ecoli 360 HCP酶联免疫吸附测定试剂盒是一种夹心酶联免疫吸附测定法，将以微测试板形式进行。
本试验用于大肠杆菌宿主Ecoli-HCP的体外定量测定。
细胞蛋白）重组生产过程中的相关样品
各自的Ecoli细胞系。
该试剂盒包含执行HCP酶联免疫吸附试验所需的所有试剂。
测定范围包括2 ng/ml到100 ng/ml的Ecoli HCP的初步工作范围。
2.试剂盒中提供的试剂和材料
3.所需但不随套件提供的材料和设备
•超纯水（至少双蒸馏质量），用于稀释洗涤缓冲液（10x）
•吸水纸巾，用于去除微试板清洗后的残留液体。
•用于制备标准、控制和样品的合适反应管
•适合洗涤缓冲液的容器
•适用于有效多通道移液的试剂库
•培养过程中覆盖微型测试板的盖子
•轨道微测试板振动筛（约500转/分）和涡流混合器
•微型测试板清洗机（也可以手动清洗）
•精密移液管（体积可调，从10微升到5000微升），带有合适的
•多通道移液管（100μl），带有合适的
•用于在450 nm（参考波长620）下测量光密度的微型板阅读器-
690牛米）
4试剂的储存
所有提供的试剂（1到8）应在2-10°C下冷藏，并在使用前使用。
到期日期。
5试验原理
Ecoli 360 HCP酶联免疫吸附试验是基于96孔微试板的夹心酶免疫分析。
（1X8F条格式）。可能含有Ecoli-HCP杂质的样品在微型测试板中培养。
预先涂有多克隆山羊Ecoli-HCP特异性捕获抗体和不同Ecoli-HCP标准浓度孵育后校准曲线及平板
去除未结合成分的洗涤步骤，一种特定的生物素结合Ecoli-HCP特异性加入检测抗体，进一步洗涤后，结合检测抗体依次与酶结合物（链霉亲和素结合过氧化物酶）作为示踪剂反应。
洗涤步骤，以四甲基联苯胺（TMB）为酶底物进行显色反应。产生蓝色。在底物培养时间结束时，反应被加入硫酸，将蓝色变为黄色，测量光密度。
在450 nm（参考波长620-690 nm）波长下进行光度测量。
井内密度与井内Ecoli-HCP浓度成正比。
根据相应的Ecoli-HCP计算未知样品的浓度。
校准曲线。
警告和注意事项
-本试剂盒仅用于体外研究，只能由合格人员使用。
-开始分析前，仔细阅读说明书。
-注意批号和有效期。不要混合不同批次的试剂。不要使用过期的。
试剂。
-遵循良好的实验室实践和安全指南。穿着实验室外套、一次性手套和
必要时戴防护眼镜。
-试剂盒中的某些试剂含有Proclin®300作为防腐剂。这些试剂可能会腐蚀眼睛。
以及皮肤刺激，应小心处理。如果接触到眼睛或皮肤，
立即用水冲洗。
-储存避光底物溶液。
-停止溶液由0.5摩尔硫酸组成。该试剂具有腐蚀性，可能导致
眼睛和皮肤有刺激性。应小心处理。如果接触到眼睛或皮肤，
立即用水冲洗。
-剩余的试剂盒试剂和准备好的溶液必须被视为潜在危险。
根据国家的安全指南和法规进行废物处理。
7样品处理和储存
工艺衍生样品中HCP的稳定性尚未得到研究，因此，样品
应冷藏（2°-10°C）或冷冻（等于或低于-20°C），具体取决于
样品中重组产物的温度要求。一般来说，反复冻结/
应避免样品解冻。
8试剂制备
8.1清洗缓冲液的制备（1X）
使用前用超纯水（例如100 ml 10x）稀释洗涤缓冲液10x（2）1:10
用900毫升超纯水浓缩，洗涤液（1X）在室内稳定。
温度，可在准备日后使用两周。
8.2编制Ecoli HCP标准
本试剂盒中提供的HCP标准是由Ecoli菌株制备的主标准。
BL21或W3110细胞溶解物，调节主标准的蛋白质浓度。
基于Bradford蛋白质法。
Ecoli 360 HCP酶联免疫吸附测定的标准浓度应根据
在进行分析之前，试剂盒中相应的Ecoli HCP标准（4）。
Ecoli 360 HCP Elisa试剂盒说明书Biogenes GmbH版本2018年1月
- 4—
8在包含分析工作的分析缓冲液（3）中制备了ELISA标准品（S1至S8）。
根据以下稀释方案，范围（约2 ng/ml至100 ng/ml Ecoli HCP）。
标准应仅在编制之日使用。
8.3检测器抗体工作液（1X）的制备
用分析缓冲液（3）稀释检测器抗体100x溶液（5）1:100，进行一次微试验。
将120μl的100x浓缩液与12 ml分析缓冲液混合。此项工作
溶液只能在配制当天使用。
8.4酶结合工作液（1X）的制备
用分析缓冲液（3）稀释酶偶联物100x溶液（6）1:100，进行一次微试验。
将120μl的100x浓缩液与12 ml分析缓冲液混合。此项工作
溶液只能在配制当天使用。
9样品制备
如果存在集料，应通过离心去除集料，以确保适当
分析性能。一般来说，所有样品工作稀释液只能在
准备工作。
在分析之前，应使用分析缓冲液（3）稀释样品。小样品稀释度
应为1:2。每种样品类型的宜样品稀释度必须由用户确定，
根据HCP含量，考虑分析工作范围。
10化验程序
所有酶联免疫吸附测定步骤均在室温（18-26°C）下进行。
使用前，让试剂盒的所有材料和试剂达到室温。
在达到室温之前，不要打开预涂微型测试板（1）的箔袋。
未用于分析的剩余板条应重新包装到袋中
干燥剂。把袋子封紧，以便冷藏。
在所有孵育步骤中，培养皿应盖上盖子（不随试剂盒一起提供），以便
防止溶液蒸发和污染。
1。用标准品和样品培养：
用100μl/孔的Ecoli HCP标准品和分析对照品以及稀释液填充平板。
样品和连续摇动培养2小时。标准，分析控制和
应至少对样品进行重复分析。建议使用三种方法。
2。清洗：
去除洗井内容物，用250微升/洗井冲洗板4x。
缓冲器（1X）。洗完后，将板倒置，用强力攻丝将残液丢弃。
吸水纸上的盘子。
三。与检测抗体孵育：
用100μl/孔的检测抗体工作液（1X）填充平板并孵化。
连续摇动1.5小时。
4。清洗：
去除洗井内容物，用250微升/洗井冲洗板4x。
缓冲器（1X）。洗完后，将板倒置，用强力攻丝将残液丢弃。
吸水纸上的盘子。
5。与酶结合物孵育：
用100μl/孔的酶结合工作液（1X）填充培养板并孵化。
持续摇晃20分钟。
6。清洗：
去除洗井内容物，用250微升/洗井冲洗板4x。
缓冲器（1X）。洗完后，将板倒置，用强力攻丝将残液丢弃。
吸水纸上的盘子。
7。用底物溶液培养并停止：
加入100μl/孔的底物溶液（7），用
连续摇晃。如果15分钟后颜色发展太低，则基板
潜伏期可延长至30分钟。
直接向板中加入100μl/孔的停止液（8），停止颜色反应。
产生黄色产品。
8。测量：
用多通道显微板阅读器测量450 nm（OD450）处的光密度，并
给出分析的原始数据。620 nm到690 nm之间的参考波长为
推荐。
Ecoli 360 HCP Elisa试剂盒说明书Biogenes GmbH版本2018年1月
- 6—
11计算
为了生成标准曲线和分析控制和样品的计算，平均
对应复制每个标准的OD450值。
借助适当的软件生成标准曲线，宜使用非线性曲线
四参数或五参数方程的回归模式。
根据校准曲线计算的未知样品浓度必须乘以
样品的稀释系数。
