zeptometrix 0801198说明书
CATALOG# 0801198
预期用途
牛IgG-ELISA试剂盒是一种快速、简便的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法
用于牛初乳、牛奶、血清、血浆或其他生物液体中牛IgG的测定。化验结果包括
大部分是现成的试剂，使用不到两个小时。试剂盒中的微孔板和检测抗体
与牛IgG的所有亚类反应一致。
免疫-TEK牛IgG-ELISA试剂盒仅供研究使用。
试验原理
涂有牛IgG多克隆抗体的微孔板形成了检测的捕获阶段。这些抗体
与牛IgG的所有亚类均匀结合。捕获的牛IgG然后与检测抗体反应，检测抗体是
与牛辣根过氧化物酶结合的多克隆抗牛IgG。该试剂也与所有
牛IgG的亚类。然后，以四甲基联苯胺为底物，对井中的酶活性进行定量。
试剂
提供的材料：
•微孔板（1x96孔）：涂有纯化山羊抗牛IgG的条带
检测抗体（12毫升）：含有共轭山羊抗牛IgG过氧化物酶
•牛IgG标准品（7 mL）：含牛IgG和检测稀释液
•分析稀释剂（100毫升）：含有PBS、Triton X-100®和2-氯乙酰胺
•洗板缓冲液（125毫升）：含有PBS、吐温20®和2-氯乙酰胺
•底物（12毫升）：含有四甲基联苯胺（TMB）
•停止溶液（12毫升）：专有配方
•微孔板密封剂（1 pk）：每包10个密封剂
•塑料袋（1袋）：用于储存未使用的微孔板条
？Triton X-100是Union Carbide Chemicals and Plastics Co.，Inc.的注册商标。Tween 20是帝国化学工业的注册商标
需要但未提供的材料：
•一次性手套
•用于制备样品和IgG标准稀释液的试管和试管架
•经验证的单通道和多通道可调微量吸管
•蒸馏水或去离子水
•经验证的培养箱能够保持37℃+1℃
•量筒和各种烧杯
•经验证的微量滴定板阅读器
•自动微量滴定板清洗机或手动真空抽吸设备
•计时器
储存
将所有试剂盒储存在2-8°C。不要冷冻。未使用的微孔板条应保存在密封袋中，并用干燥剂
尽量减少暴露在湿气中。所有储存和妥善处理的试剂都是稳定的，至少在到期日之前
工具箱标签。
注意事项
仅供研究使用。不用于诊断程序。
•在进行分析之前，仔细阅读所有说明。
•在处理套件组件和试样时使用通用预防措施*
•为避免交叉污染，对每个样本使用单独的移液管。
•在测试潜在感染性样本时，遵守所有适用的地方、州和联邦法规
生物危险品的处置。
•停止液中含有盐酸，可能导致严重烧伤。如果接触到眼睛或皮肤，请冲洗
立即用水并寻求医疗救助。穿防护服和护目镜。
*《海洋资源综合报告》，1988年6月24日，第37卷，第24期，第377-382、387-388页
试剂的制备
洗板缓冲器
使用前，用蒸馏水或去离子水稀释10倍洗板缓冲液1:10。充分混合。准备1X洗板缓冲液
可在2-8℃下储存一周。如有以下情况，可订购额外的10倍洗板缓冲液（ZMC目录#：0801060）
需要。
牛IgG标准曲线
如表所示，给6个试管贴上标签。牛IgG标准品的浓度为125ng/mL，应在分析时稀释
稀释如下以制备标准曲线。
样品稀释
牛初乳通常含有50-80毫克/毫升的IgG抗体。牛初乳1:1000000稀释试验
初次试验推荐使用稀释剂。
牛乳通常含有约0.5mg/mL的IgG抗体。初次试验时，建议使用1:10000稀释的试验稀释液稀释牛乳。
牛血清通常含有25-30毫克/毫升的IgG抗体。初次试验时，建议使用1:500000稀释的试验稀释液稀释牛血清。
试验程序
使用前让所有试剂达到室温。对用于制备标准品和试样的试管贴上标签。如果不使用整个96孔板，从板架上取下多余的板条，并用干燥剂放入可重新密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下储存。
步骤1：在每个板条的末端标签上贴上标签，以确保在
化验。
第2步：用移液管将200μl标准品1-6移到两个孔中。
第3步：用移液管将每个样品200μl移到两个孔中。
步骤4：用封板器盖住微孔板，在37℃下孵育30分钟。
第五步：吸出每口井的内容物，用1个洗板缓冲液清洗4次。洗的时候，把井灌满
300μl 1X洗板缓冲液并抽吸。执行4次加注/吸气循环。在后一次清洗循环后，*清洗
小心地在一块吸水纸巾上敲击盘子，以吸干盘子。继续，直到没有可见的液滴
观察洗板缓冲。
第6步：用移液管将100μl检测抗体移到每个标准品和样品中。
不要在基质空白处加入检测抗体。
第7步：用封板器盖住板，在37℃下孵育30分钟。
步骤8：使用步骤6所述的洗板缓冲液洗板4次。
第9步：用吸管将100μl基质吸进每个孔，包括基质空白孔。
第十步：在室温下孵育30分钟。含有牛IgG的井中会出现蓝色。
第11步：用移液管将100μl停止液移到每个孔中。将发生从蓝色到黄色的颜色变化。
第12步：在15分钟内，用微量滴定板阅读器在450 nm处读取每个孔的光密度。
预期结果
下面是标准曲线的示例，不应用于计算实际样本。可以观察到变化
由于移液管、培养箱温度、读板器等原因，从一个实验室到另一个实验室。
计算结果
测试有效期：
•为了使试验有效，0 ng/mL标准品和基底空白的平均光密度必须低于0.200。
•125 ng/ml的平均光密度必须大于1.000。
•当平均光密度值不在标准曲线范围内时，建议用较大或较小的稀释度重新分析样品。
计算：
一。计算每组标准品和稀释样品的平均光密度（OD）值。
2。使用线性图形纸或绘图软件，绘制每个标准在Y轴上的平均OD值与X轴上相应的标准浓度。
三。通过这些点绘制宜拟合曲线以构建标准曲线。在大多数情况下，线性回归图是足够的，但对于准确的结果，使用点对点或4参数logistic回归。
四。用标准曲线插值法测定每个稀释样品的IgG浓度。
5个。乘以用于稀释每个样品的稀释系数，以确定原始样品的IgG浓度。
PROCEDURAL FLOW CHART
