AQP4 Ab ELISA V2

rsrltd AQP4 Ab ELISA V2

综合使用

该RSR AQP4自身抗体ELISA版本2试剂盒仅供专业人

员使用，用于定量测定人血清中AQP4自身抗体

(AQP4Ab)。 视神经脊髓炎(NMO)，又称Devic综合

征，是一种免疫介导的神经疾病，涉及脊髓和视神

经。 它可以被认为是一种不同于多发性硬化(MS)的

疾病。 血清免疫球蛋白G自身抗体(NMO-IgG)已被证

明是NMO的特异性标记，水通道水通道水通道蛋白

4(AQP4)已被鉴定为NMOIgG的抗原。 当充分的临床

特征可能不明显，早期干预可能预防或延迟残疾

时，AQP4Ab的测量在区分NMO和MS方面具有相当

大的价值。

参考资料

V.A.Lennon等人。

视神经脊髓炎的血清自身抗体标志物：与多发

性硬化症的区别。

2004364（9451）：2106-2112

V.A.Lennon等人。

视脊多发性硬化症Ig G标记物与水通道结合。

2005年实验医学杂志202：473-477

B.G.Weinshenker等人。

视神经髓炎IgG预测纵向广泛的横向脊髓炎后复

发。

2006年神经病学年鉴59：566-569

N.Isobe等人。

视神经脊髓炎抗aquaporin-4抗体的定量分析及

亚类分析。

多发性硬化症杂志201218：1541-155

S.Jarius等人。

ELIS A法检测人水通道蛋白-4抗体：敏感性、

特异性及与免疫组织化学的直接比较。

神经科学杂志2012320

32-37

支出

下列适用：

欧洲EP1700120B1，

美国7,101，679

美元 B2， 美国 7,947,254

B2 和 美国

中国ZL200880040851.3

日本4538464。

亚洲原则

在RSR的AQP4AbELISA版本2试剂盒中，患者血清中

的AQP4Ab允许校准器和对照组与涂在ELISA板井和液

相生物素化AQP4(AQP4-生物素)上的AQP4相互作用。

室温孵育2小时后随摇，井内容物丢弃.. 与涂在井上

的AQP4结合的AQP4Ab也将通过样品中AQP4Ab的能

力 与 AQP4-Biotin 相 互 作 用 ， 使 AQP4-Biotin 通 过

AQP4Ab桥与井结合。 然后，在第二个孵育步骤中确

定AQP4-Biotin结合的数量，该步骤涉及添加链霉亲

和素过氧化物酶(SA-POD)，该酶与生物素特异性结

合。 过量的、未结合的链霉亲和素过氧化物酶被冲

走，加入过氧化物酶底物3，3‘，5，5’-四乙基联苯

胺(TMB)，形成蓝色。 这种反应是通过加入一个停

止溶液来停止的，导致井内物变黄。 然后用ELISA平

板阅读器读取黄色反应混合物在450nm和405n m处

的吸光度。 较高的吸光度表明测试样品中存在AQP4

自身抗体。 在405n m处读取允许定量高吸收。 建议

在450n m处测量低于10u/mL的值.. 如果只能在一个

波长405n m处读取，则可以使用。 测量间隔为3.0-

80u/mL(任意RSR单位)。

档案 和发展 筹备工作

所设委员会 SERUM样品

待分析的血清应在分离或储存后不久测定，宜是

在-20或以下的别名中测定

奥

C. 100L足以

作一次化验（重复50次） 确定)。 应避免反复冻

融或储存温度升高.. 不要使用脂血

症或溶血的样本。 研究表明，EDTA、柠檬酸和肝素

血浆样品中加入AQP4A B阳性血清的信号与来自同一

供体的加标血清相比略有变化。 特别是OD450 加

标EDTA、柠檬酸和肝素等离子体的值为加标血清的

79%-128%(血清浓度为2.6u/ml-30u/ml)或87%-130%。

当需要时，在室温下解冻测试血清，并轻轻混合，

以确保均匀性。 测定前离心血

清（宜在10，15，000转/分的微格中离心5分钟）

以去除颗粒物质。 如果血清是多云的或含有微粒，

请不要遗漏这一离心步骤。

综合

文号 意义

欧共体遵守情况声明

IVD 体外诊断装置1

圣斯特

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年5月

第4页2 订正5

参考资

料

目录编号

旅馆 批号

查阅指引

由

足以

终止日期

商店

负控制

积极控制

需要但未提供的材料

能够分发25个 L，50 L和100 L.

测量各种体积的方法，以重建或稀释所提供的试

剂。

纯净水。

ELISA平板阅读器适用于96个井格式，可在450nm

和405n m处测量。

ELISA平板摇床，可摇动500次/分钟（不是轨道

摇床）。

ELIS A板盖。

拟订所提交的

将未开封的试剂盒和所有试剂盒组件存放在2-8

奥

C.

ASSA程序

允许所有试剂在室温下（2025年）

奥

使用前至少

C)30分钟。 不要重建AQP4-生物素，直到下面的步骤

2。 对于步骤2、5、8和9，建议使用Eppendorf型重

复吸管。

1. 管道50 将病人血清、校准器(B1-5)和

对照器(C1-2和D)放入各自的井中。 留

下一个

空得很空。

2. 重组 AQP4-生物毒素 和

移液管25 入每口井（空

白除外）..

3. 盖上框架，在室温下用ELIS A法摇动2小

时

平板摇床（每分钟500摇）。

4. 使用ELIS A板垫圈吸气，用稀释洗涤液

(J)洗三次井。 如果没有平板垫圈，用

适当的贮器迅速地将井框倒置，然后用

手洗三次，然后轻轻地用干净的干吸收

剂轻轻地敲击倒置的井

表面去除多余的洗涤。

E.

AQP4-

Biotin3小瓶

冻干机

在使用前，立即用重建缓冲器重建

AQP4-生物毒素(F)，

每瓶1.5毫升。 不止一瓶

要使用，将瓶子的内容物集中起

来，轻轻混合。

F

AQP4-生物素重建缓冲剂10mL

准备使用

G.

链霉亲和素过氧化物酶(SA-POD)

0.8米L

用 稀 释 剂 在 20 中 稀 释 1 ， 以 稀 释

SAPOD(H) 。 例 如 ， 0.5 米 L(G)+9.5 米

L(H)。 2-8多储存16周

奥

C.C

稀释后。

H.

SA-POD15m L稀释

剂

准备使用

我

是

过氧化物酶(TMB)15米L

准备使用

J

浓缩洗涤液120毫升

集中

使用前用纯水稀释1/10..

储存于2-8

奥

直到工具包失效日期。

KK

停止使用14

米升

准备使用

A.

AQP4覆盖井

一个框架内12条8口井（总共96口）的破

碎条，密封在箔袋中。 允许箔袋在室温

下站立（20-25）

奥

C)30分钟

在打开之前。

确保井牢固地安装在所提供的框架中。

打开后，将任何未使用的井返回原箔袋，

并用胶带密封。 然后将铝箔袋放入装有

干燥剂的自封塑料袋中，存放于2-8

奥

C

多

4个月。

B1-

5

计算器

1.5、5、20、40、80微克/升

(任意RSR单位)

准备使用

C1-

2

积极控制一和二

（见浓度范围标签）

准备使用

D.D.

负控制

0.7米

准备使用1

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第4页3 订正5

在405n m处的吸光度读数可以通过乘以适当的因

子(在RSR使用的设备的情况下为3.4)来转换为

450nm的吸光度..

关闭警报

阴性 <3.0u/m L

积极正面  3.0u/m L

结果分析

通过在x轴（对数标度）上绘制校准器浓度与y轴

（线性标度）上校准器的吸光度之间的关系，可

以建立校准曲线。 然后，患者血清中的AQP4Ab

浓度可以读出校准曲线[在RSR上绘制为样条log/lin

曲线（平滑因子=0）]。 可以使用其他数据还原系

统.. 阴性对照可赋值0.15u/ml，协助计算机处理分

析结果。 AQP4Ab浓度高于80u/mL的样品可以稀

释(例如。

AQP4A b阴性血清中10x和/或100x)。 有些血清不

会以线性的方式稀释。

实际结果（仅示例；不用于计算实际结果）

这一切断已在RSR验证。 然而，每个实验室应建立

自己的正常和病理参考范围的AQP4Ab水平。 此

外，建议每个实验室在分析中包括自己的对照样品

面板。

化学评价

(以下资料来自450nm数据)

临床特异性

来自358名个人健康献血者的血清在AQP4AbELISA

版本2试剂盒中进行了测试。 356（99%）血清为

AQP4Ab阴性。

临床敏感性

在62例NMO或NMO频谱紊乱(NMOS D)患者中，48

例（77%）为AQP4Ab阳性。

下限检测限

阴性对照测定20次，计算均值和标准差。 在2个

标准差下检出限为

0.17微克/升

内测精度

样本 平均单位/单位L

（单位=25）

简历

（%）

1 3.9 7.7

2 7.0 8.6

3 28 3.2

4 58 3.1

Inter Assess精准度

样本 平均单位/单位L

（单位=20）

简历

（%）

A. 5.0 15.6

B.B. 13.3 10.5

C.C 35 7.9

D.D. 59 7.5

4

5

0

n

m

处

的

吸

光

度

5. 管道100 稀释后的SA-POD(G)升

每口井（空白除外）。

6. 盖上盘子，孵育20分钟

室温下在ELISA平板摇床上分钟（每分钟

500次摇）。

7. 重复洗涤步骤4。 如果正在进行手动清

洗，则使用纯水进行后清洗步骤（以

去除任何泡沫）。

在把井敲干之前。

8. 管道100 将TMB(I)L放入每口井中（包括

空白），室温下在黑暗中孵育20分钟。

没有颤抖。

9. 管道100 将L停止溶液(K)注入每口井

（包括空白），并在平板摇床上摇动约5

秒。 确保底物孵育

每口井都是一样的。

10. 在10分钟内，用ELIS A板阅读器读取每口

井在450nm和405n m处的吸光度，并在

100口井上空白 TMB(I)及

100 只有L停止溶液(K)。

A450

nm波

长

Conc.

单

位：

A405

nm

波长

Conc.

单

位：

阴性对照(D) 0.021 0.006

B1 0.085 1.5 0.024 1.5

B2 0.354 5 0.108 5

B3 1.577 20 0.468 20

B4 3.802 40 1.118 40

B5 6.588 80 1.938 80

积极控制(C I) 0.755 12.1 0.224 12.0

阳性对照(CII) 2.506 28 0.745 281

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第4页4 订正5

临床准确性

除视神经脊髓炎频谱紊乱(NMOS D)以外的自身免

疫性疾病患者的205份血清分析表明，自身抗体

对TSH受体(n=110)、谷氨酸脱羧酶(n=26)、21羟化

酶(n=12)、乙酰胆碱受体(n=10)、甲状腺过氧化物

酶(n=15)、甲状腺球蛋白(n=10)、IA-2(n、7)或类

风湿因子(n=15)的干扰。

干涉

当样品加入以下材料时，没有观察到干扰；胆红素

在20mg/dL或脂内高达3000mg/dL。 血红蛋白在

500mg/dL时有干扰。

安全考虑

链霉亲和素过氧化物酶(SA-POD)信号

词：警告

危险说明

H317：可能会引起皮肤过敏反应

P280：戴上防护手套/防护服/眼睛保护/面部保

护

P302+P352：如果在皮肤上：用大量肥皂和

水清洗

P333+P313：如果发生皮肤刺激或皮疹：请就

医/注意

P362+P364：脱去污染的衣着，洗净后再用

过氧化物酶(TMB)信号

词：危险危险声明

H360D：可能会伤害未出生的孩子

亚洲计划

防范说明

P280：戴上防护手套/防护服/眼睛保护/面部保护

P308+P313：如果暴露或有关：获得医疗建议/

注意

该工具包仅供专业人员使用。 仔细遵照指示。 观察

标签上规定的过期日期和重组试剂的稳定性。

有关更详细的安全信息，请参阅安全数据表。 避免

所有可能导致摄入的行为。 避免接触皮肤和衣物..

穿着防护服。 用于制备试剂盒的人类来源材料已进

行了测试，发现HIV1和2、HCV抗体和HBsAg均无反

应，但应毫无反应地处理为具有潜在传染性。 如果

有污染，在离开实验室之前*洗手。 对所有潜在

污染的废物进行消毒，包括处置前的测试样本。 用

于制备试剂盒的动物来源材料已从经认证为健康动

物中获得，但这些材料应作为潜在的传染性处理。

部分成分含有少量叠氮钠作为防腐剂.. 与所有试剂

盒成分，避免摄入，吸入，注射或接触皮肤，眼睛

或衣服.. 避免在排水系统中形成重金属叠氮化物，

方法是用大量的水冲走任何试剂盒组件。

允许所有试剂和样品达到室温（20-25）

奥

使用前C)

吸管： 50 L校准器、对照组和病人血清

吸管： 25 LAQP4-Biotin（重组)进入每口井(空白除外）