ArcticZymes 80200-250附加说明

加热和运行DNA去除试剂盒

可以预期 RNA 完整性的一些损失。因此，不建议在 qPCR 设置之外使用试剂盒。

根据 qPCR 指导原则设计引物。

确保 RNA 和反应缓冲液在混合前冰冷。

HL-dsDNase 消化含有终 Mg2+ 因此，RT 反应中镁的残留必须为

考虑。如果使用 10µl 消化的 RNA，20µl RT 反应中的镁浓度将增加 1.5 mM。

如果用于下游 cDNA 合成的 RT 试剂盒与额外的镁不相容，则可实施以下步骤：

• 逆转录前稀释 DNase 处理的 RNA

使用较小部分经 DNase 处理的 RNA 进行逆转录

Nase 处理（多 50µl）。考虑 Mg2+ 将存在于剩余 RNA 中，这可能影响其长期稳定性。

如果 RNA 的体积超过 20µl，可能有利于将 HL-dsDNase 的量加倍。

反转录前避免将去污的 RNA 和引物预热到 60 ℃ 以上。

性质

ArcticZymes 的 Heat&Run gDNA removal kit 预期用于从高质量 RNA 中去除 gDNA，用于 qPCR。RNA 浓度 > 50 ng/

推荐使用 µl。该试剂盒基于 ArcticZymes 公司的热不稳定双链特异性 dna 酶（HL-dsdna 酶）。DNase 处理后，HL-dsDNase 很容易被温度的适度升高 (58 ℃) 灭活。gDNA 去除和逆转录可以在同一管中进行，从而大限度地减少移液步骤，减少动手时间。

来源

HL-dsDNase 是来自北极虾的 dsDNase 的突变版本。HL-dsDNase 在非动物宿主（酵母）中重组表达。

试剂盒内容物

80200-50：HL-dsDNase（1 瓶）和 10x 反应缓冲液（2 瓶），足以进行 50 次反应。

失效日期

参见标签。

储存

Store at -20 °C 下储存。建议等分反应缓冲液，以避免反复冻融循环。

保持反应缓冲液冷却。

样品材料

HL-dsDNase 适用于任何来源 RNA 的去污。该试剂盒与 RNase 抑制剂相容。EDTA 和高盐浓度会降低 HL-dsDNase 的活性。

质量控制

检测试剂盒内容物是否存在 RNase。

方案

设置加热和运行反应，如下所示：

1. 向置于冰上的空试管中加入 1µl HL-dsDNase注：使用与预期用于逆转录相同的试管。
2. 每 10µl RNA 加入 1µl 10x 反应缓冲液
3. 加入 8-50µl 您的 RNA

注：如果预期使用同管逆转录，确保 HL-dsDNase 反应的总体积不超过 RT-kit 的大输入限值。

1. 37 °C 下孵育 10 min（gDNA 消化）

注：也可在 25 ℃ 孵育 20 min。

1. 在 58 ℃ 下孵育 5 min（HL-dsDNase 灭活）
2. 进行逆转录。

注：将您选择的 RT 试剂直接加入 HL-dsDNase 反应混合物中。

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