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CHOgro®高产量表达系统
（试剂盒包括：CHOgro®表达培养基（2 x 1 L），CHOgro®复合物形成溶液（100 ml），L-谷氨酰胺（100 ml），泊洛沙姆188溶液（100 ml），Trans IT- PRO®转染试剂（1毫升），CHOgro®滴度增强剂（20毫升））CHOgro®转染和滴度增强试剂盒
（试剂盒包括：反式 IT-PRO®转染试剂（1ml）中，CHOgro®滴度增强（20毫升））CHOgro®表达培养基CHOgro®复合物形成解决方案泊洛沙姆188溶液，10％L-谷氨酰胺溶液，200 mM跨 IT-PRO®转染试剂
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先生62701套
选择的目录号：MIR 6270
NEW CHOgro®高产表达系统对于高产量的蛋白质生产中悬浮的CHO细胞上的和具有成本效益的瞬时转染系统。我们的第二代系统具有CHOgro®滴度增强剂，可提供业界的快速蛋白质产量。
使用多种抗体构建体的CHOgro®高产量表达系统优于ExpiCHO表达系统。 六个不同的IgG1抗体构建体，包括在相同的载体骨架合成的5个治疗相关的构建体通过使用瞬时转染产生的反式 1试剂对DNA比率（体积：IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio公司）以1： wt和1 µg质粒DNA每毫升培养在CHOgro®表达培养基（Mirus Bio）中的FreeStyle™CHO-S细胞（ThermoFisher Scientific）中，细胞密度为4 x 10 6细胞/ ml，或Expifectamine CHO转染试剂盒（ThermoFisher Scientific），在ExpiCHO-S细胞（ThermoFisher Scientific）中每毫升培养物每毫升培养液的DNA含量为3.2：1试剂对DNA（vol：wt）和1 µg质粒DNA表达培养基（ThermoFisher Scientific），细胞密度为6 x 10 6细胞/毫升 在转染时，将所有细胞分成125ml的生长烧瓶（25ml /瓶，Thomson Instrument Company）。添加转染复合物后立即添加CHOgro®滴度增强剂，并将培养物在32°C摇动下孵育，直至收获CHOgro®高产量表达系统。ExpiCHO表达系统（ThermoFisher Scientific）遵循大滴度规程：转染后24小时加入Expifectamine CHO增强剂和饲料（ThermoFisher Scientific），并将培养物移至32°C。在第5天，将第二体积的ExpiCHO进料（ThermoFisher Scientific）添加到烧瓶中。使用标准夹心人IgG ELISA分析第7天和第14天的上清液。误差棒代表一式三份技术重复的标准偏差。
在CHOgro®表达培养基中生长的FreeStyle™CHO-S和ExpiCHO细胞产生相似的滴度。
在CHOgro®表达培养基（Mirus Bio）中培养FreeStyle™CHO-S细胞（ThermoFisher Scientific）或ExpiCHO-S细胞（ThermoFisher Scientific）。两种细胞系中瞬时与编码人IgG1内部对照抗体的质粒DNA转染的，贝伐单抗或使用Fc融合构建体反式 IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio公司）以1：1的试剂对DNA比率（体积：在未经处理的6孔板中，每毫升培养液含有1 wt g DNA和1 µg质粒DNA。将所有培养物移至32°C，摇动，然后将转染复合物和CHOgro®Titer Enhancer添加到培养物中。使用标准夹心人IgG ELISA分析第14天的上清液。误差棒代表一式三份技术重复的标准偏差。
CHOgro®滴度增强剂不会对转染后的细胞生长和活力产生不利影响。FreeStyle™CHO-S细胞的一式三份培养瓶适于CHOgro®表达培养基与瞬时转染跨 IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio公司）以1：1的试剂对DNA比率（体积：重量）和1μg每毫升培养物的质粒DNA为4 x 10 6在125毫升Optimum Growth烧瓶（25毫升/瓶，汤姆森仪器公司）中的细胞数/毫升。如所示，添加了CHOgro®Titer Enhancer，并且在将转染复合物添加到培养液后立即将所有培养液转移至32°C。转染后每天使用Guava®easyCyte™5HT流式细胞仪（EMD Millipore）测量细胞计数（实线）和生存力（碘化丙啶染色，虚线）。
CHOgro®高产量表达系统可扩展1000倍。 人IgG1是通过用瞬时转染产生的 反式 1试剂：DNA比IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio制）和每毫升培养液1微克质粒DNA在1。Freestyle CHO细胞（Thermo Fisher Scientific）以4 x 10 6的密度转染 在以下体积/培养容器中的CHOgro®表达培养基（Mirus Bio）中的细胞数/ ml：2 ml /非组织培养物处理过的6孔培养皿，20 ml / 125 ml Thomson烧瓶，500 ml / 1.6 L Thomson烧瓶，2000 ml / 5 L汤姆森烧瓶。将所有培养物移至32°C，摇动，然后将转染复合物和CHOgro®Titer Enhancer添加到培养物中。在其余的实验中，将培养物保持在适当的摇动速度下。使用标准夹心人IgG ELISA分析第14天的上清液。误差棒代表一式三份技术重复的标准偏差。
使用多个Fc融合构建体观察到效价增强。使用两种不同的Fc融合构建体瞬时转染跨每毫升培养液：（重量体积）和1μg的质粒DNA试剂1到DNA比：以1 IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio公司）。将FreeStyle™CHO-S（ThermoFisher Scientific）细胞培养在CHOgro®表达培养基（Mirus Bio）中，并以4 x 10 6接种在未处理的6孔板中转染时的细胞数/ ml（2 ml /孔）。如所指示的，添加了CHOgro®滴度增强剂，并且在将转染复合物添加至培养物后立即将培养物转移至32℃。使用标准的夹心人IgG ELISA分析第10天的上清液。误差棒代表一式三份技术重复的标准偏差。
第三方使用CHOgro®高产量表达系统和CHOgro®滴度增强剂实现的更高滴度。Fc融合蛋白通过在完整CHOgro®媒体CHO-S细胞的瞬时转染产生的使用反式（1:1试剂：DNA比率，体积：重量1）IT-PRO®转染试剂。用于转染的细胞为2 x 10 6细胞/ ml（无CHOgro®Titer Enhancer）或4 x 10 6（含CHOgro®Titer Enhancer）。转染后24小时（无CHOgro®滴度增强剂）或立即（有CHOgro®滴度增强剂）将培养物转移至32°C。产量代表转染后第11天收获的0.5 L培养物中的终亲和纯化蛋白。
反式 IT-PRO®+CHOgro®滴度增强性能优于PEImax和线性25kDa的PEI转染试剂。 的IgG1抗体构建体通过使用瞬时转染产生的反式 1试剂对DNA比率（体积：重量），PEImax（4：1，Polysciences公司），或IT-PRO®转染试剂（Mirus公司Bio公司）以1在CHOgro®表达培养基（Mirus Bio）中以4 x 10 6的细胞密度培养的FreeStyle™CHO-S细胞（ThermoFisher Scientific）中每毫升培养液中线性25 kDa PEI（6：1，Polysciences）和1 µg质粒DNA细胞/毫升 添加转染复合物后立即添加滴定增强剂（CHORUS®Titer Enhancer）（Mirus Bio），将培养物在32°C振摇下孵育，直至收获所有试剂。使用标准夹心人IgG ELISA分析第14天的上清液。误差棒代表一式三份技术重复的标准偏差。
储存条件：
所有配置：多种储存条件-有关具体建议，请参见各个瓶子。
产品保证：
所有配置：如产品组件上的标签所示
完整协议
CHOgro®高产量表达系统完整方案（PDF）
快速参考协议
CHOgro®复合物形成溶液QRP （PDF）
CHOgro®表达培养基QRP （PDF）
CHOgro®转染和滴度增强试剂盒QRP （PDF）
产品数据表
L-谷氨酰胺产品数据表（PDF）
泊洛沙姆188产品数据表（PDF）
安全数据表
CHOgro®表达培养基SDS （PDF）
CHOgro®高产表达系统SDS （PDF）
CHOgro®转染和滴度增强套件SDS （PDF）
L-谷氨酰胺的解决方案SDS （PDF）
泊洛沙姆188溶液SDS （PDF）
跨 IT-PRO®转染试剂SDS （PDF）
