kerafast 4014C1-2细胞系说明书
该鼠成纤维细胞系是4B6 / 3598/3442＃2 / 4011C1细胞系（目录号ESA104）的衍生物，并将mtDNA保持在减少的拷贝数上。为了产生该细胞系，将维持mtDNA拷贝数在正常水平的亲代细胞用质粒pMA4014瞬时转染，该质粒编码mCherry和FLPo，并针对转染的细胞进行流分选。由于FLPo介导的在细菌LigA基因前面的MTS切除，导致4B6 / 3598/3442＃2/4011 / 4014C1-2细胞中线粒体LigA导入效率低下，并且mtDNA保持减少的拷贝数。该细胞系及其伴随的同基因细胞系4B6 / 3598/3442＃2 / 4011C1（目录号ESA104）可用于研究mtDNA拷贝数对细胞生理的影响。
来自南阿拉巴马大学Mikhail F Alexeyev博士的实验室。
| 目录编号 | 产品 | 尺寸 | 可用性 | 价钱 |
|---|---|---|---|---|
ESA105 | 4B6 / 3598/3442＃2/4011 / 4014C1-2细胞系 | 1瓶 | 有现货 | $ 399.00 |
技术指标提供者注释参考文献
技术指标
| 产品类别： | 细胞系 |
| 单元格类型： | 胚胎成纤维细胞 |
| 生物： | 老鼠 |
| 形态学： | 纺锤形合流 |
| 资源： | 鼠标E13.5胚胎 |
| 生物安全等级： | BSL 1 |
| 生长条件： | DMEM / 10％FBS。定期选择10 µg / ml杀稻瘟素，2 µg / ml嘌呤霉素和1 mg / ml G418 |
| 传代培养： | 每3天将1：4分割为1：8 |
| 冷冻保存： | DMEM / 10％FBS / 10％DMSO |
| 注释： | 快速成长 |
| 存储： | LN2 |
| 发货： | 干冰 |
提供者
来自南阿拉巴马大学Mikhail F Alexeyev博士的实验室。
注释
将Cre-TM小鼠（JAX 004682，B6.Cg-Tg（CAG-cre / Esr1）5Amc / J）与Lig3LoxP小鼠（Nature 471（2011）240-244）交叉杂交，以提供由肌动蛋白驱动的他莫昔芬诱导的Cre表达启动子。从E13.5胚胎间充质制备Lig3Cre-TM小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）。用编码SV40大T抗原的逆转录病毒构建体3315使细胞永生（J.Biol.Chem.288（2013）26594-26605），并根据其形成菌落的能力进行选择。选择了一个克隆，以其优异的生长特性命名为Cre4。用逆转录病毒2641（Mol.Biol.Rep.37（2010）1987-1991，其编码Tet-On Advanced反式激活子，EGFP和杀稻瘟素抗性）转导该克隆，从而产生命名为4B6的克隆。4B6是Cre4的Tet-On衍生物。用逆转录病毒rv3598（G418抗性）和rv3442（嘌呤霉素抗性）进一步转导Cre4，从而通过Cre介导的切除（rv3442）使细胞Lig 3基因失活，并重新表达没有线粒体靶向信号的细菌LigA基因（ MTS，rv3598）。在不存在限制mtDNA复制的Lig 3的情况下，LigA的线粒体导入效率低下会使DNA连接酶活性升高，并导致mtDNA拷贝数降低。这些细胞用逆转录病毒rv4011转导，该病毒编码与来自人鸟氨酸转氨甲酰酶的可激发的（FLPo）线粒体靶向序列融合的相同LigA。该融合蛋白被有效地导入线粒体，因此在转导的细胞中恢复了正常的mtDNA拷贝数。后，用编码mCherry和FLPo的质粒4014瞬时转染得到的细胞。由于FLPo介导的从LigA去除MTS，因此降低了所得克隆＃4B6 / 3598/3442＃2/4011 / 4014C1-2中的mtDNA拷贝数。该细胞系与同基因细胞系4B6 / 3598/3442＃2 / 4011C1结合使用，可用于研究mtDNA拷贝数对细胞生理的影响。
参考文献
