| ProGreen™杆状病毒基因组载体DNA编码维多利亚水母绿色荧光蛋白（GFP）图1。GFP可以监控重组病毒的繁殖，优化培养条件，并通过“末端绿色稀释”来滴定病毒原种。多角体蛋白位点保留用于在强多角体蛋白启动子控制下插入靶基因。初，多角体蛋白位点被大肠杆菌 β-半乳糖苷酶基因占据。为了允许插入靶基因，使用Bsu36.I限制性核酸内切酶从杆状病毒DNA中去除了β-半乳糖苷酶基因，该酶在多角体蛋白启动子的下游，β-半乳糖苷酶基因和下游必需基因ORF 1629中进行切割。 |
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| | 图1. ProGreen™DNA的示意图。基因GFP由绿色箭头指示。多面体启动子由黑色三角形表示。 大肠杆菌 β-半乳糖苷酶基因初存在于多角体蛋白位点中。但是，在市售的ProGreen™载体中，它与必需基因的一部分一起被去除，以允许用β-半乳糖苷酶基因替代感兴趣的基因（靶基因），更多信息请参考TECHNOLOGY。
ProGreen™可以驱动目标蛋白质的合成速率，该速率接近重组杆状病毒系统中针对具体目标蛋白质所能达到的大速率，同时可以高水平表达GFP（图2）。 大肠杆菌β-半乳糖苷酶（β-gal）在多角体蛋白位点中表达为靶蛋白，以便充分比较ProGreen™和常规载体BacPAK6™之间靶蛋白的合成速率。如图2所示，两种载体都将靶蛋白（β-gal）表达到大约相同的高水平，而ProGreen™也表达GFP。 |
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| |  | 图2.感染了基于BacPAK6™和基于ProGreen™的重组杆状病毒的昆虫细胞的蛋白质表达谱，这些杆状病毒在多角体蛋白启动子的控制下在多角体蛋白位点表达大肠杆菌 β-半乳糖苷酶（β-gal）。 用重组杆状病毒以每细胞5个噬斑形成单位感染重组夜蛾 Sf9细胞，并在感染后60小时收获。在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中裂解细胞，并将裂解液以30,000g离心15分钟。β-半乳糖苷酶和GFP高度可溶，几乎仅在上清液中发现。上清液蛋白在11％SDS-PAGE中分离，并用考马斯亮兰染色。 |
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| | 方法。 转到杆状病毒教程，以获取简单的分步操作说明。有关概念性细节，请参阅技术。如果您已经对这些载体有经验，则可以使用与BaculoGold™（BD Pharmingen）相同的方法。
推荐的质粒转移载体。如下图3所示，大量的质粒与ProGreen™载体兼容，可满足各种蛋白质表达和纯化要求。我们提供可以提供高效信号序列的载体（pAB-bee™，pAB-bee™-8xHis，pAB -bee-FH™质粒转移载体）以促进分泌蛋白和膜蛋白的表达。靶蛋白可以使用 GST，His，GFP，MBP或双重His / MBP或FLAG / His标签表达，或使用pVL1393质粒载体表达而无需标签。使用pAcAB3载体可以表达多达3种靶蛋白，该载体也与ProGreen™-C1和-C2载体兼容。您也可以使用与BacPAK6™或BaculoGold™载体兼容的任何质粒转移载体。 |
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| pVL1393，目录号 ＃B1 | | pAB-GST™，目录 ＃B5 | | pAB-6xHis™，产品目录。＃B4 | | pVL-FH，目录号 ＃B9 | | pAB-6xHis-MBP™，目录 ＃B7 | | pAB-MBP™，目录 ＃B6 | | pVL-GFP TM，目录号。＃B8 | | pAB-bee，目录号。＃B3 | | pAB-bee™-8xHis，产品目录 ＃B3H | | pAB-bee-FH™，产品目录 ＃B3FH | | pAB-bee，目录号。＃B3 | | | | | | | | ProGreen™，产品目录。＃A1 |
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| | 图3.与ProGreen™杆状病毒载体DNA相容的质粒转移载体的示意图。所有质粒转移载体都具有允许质粒在大肠杆菌中繁殖的相同质粒“主链” （由蓝色双线表示），但它们在多面体蛋白启动子下游部分（由黑色三角形表示）不同。有关概念性细节，请参阅技术。单击质粒名称以获取有关每个质粒的详细信息。单击Cat＃进行定价和订购。
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| | 表1.与ProGreen™兼容的其他供应商的质粒转移载体。 |
| | | 诺瓦根 | 法明根 | OET | 克隆泰克 |
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pTriEx™-1.1
pTriEx™-1.1 Hygro
pTriEx™-1.1 Neo
pTriEx™-2
pTriEx™-2 Hygro
pTriEx™-2 Neo
pTriEx™-3
pTriEx™-3 Hygro
pTriEx™-3 Neo
pTriEx™-4
pTriEx™-4 Hygro
pTriEx™-4 Neo
pTriEx™-4 Ek / LIC | pBAC™-1
pBACgus™-1
pBAC™-2cp
pBACgus™-2cp
pBAC™-3
pBACgus™-3
pBAC4x™-1
pBACgus4x™-1
pBAC™-5
pBACgus™-5
pBAC™-6
pBACgus™-6
pBACsurf™ -1 |
| BaculoGold™pAcGHLT-A
BaculoGold™pAcGHLT-B
BaculoGold™pAcGHLT-C
BaculoGold™pAcGP67A
BaculoGold™pAcGP67B
BaculoGold™pAcGP67C
pVL1392-XylE | pOET™1-5
pOET™2
pOET™1C_6xHis
pOET™2C_6xHis
pOET™1N_6xHis
pOET™2N / C_6xHis | BacPAK™8
BacPAK™9
BAcPAK™8-gus |
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| | 如果您尚未使用杆状病毒表达系统（也称为杆状病毒表达载体系统或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上进行快速更新。有关杆状病毒转染，重组杆状病毒的繁殖和重组杆状病毒蛋白表达研究的简单在线说明，请转到杆状病毒教程。 |
