bmgrp BI-20022说明书
MDA-oxLDL ELISA | BI-20022
分析特征
方法
夹心ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分离试纸
样品类型
血清，EDTA血浆，肝素血浆，柠檬酸盐血浆
样品量
20 µl /孔
测定时间
90分钟/ 90分钟/ 30分钟
灵敏度
0.05微克/毫升
标准范围
0 – 10 µg / ml
特异性
人MDA-oxLDL加合物
中间运行（n = 4）：≤7％CV
批量分析（n = 3）：≤8％CV
采用
仅供研究使用。
MDA oxLDL ELISA试剂盒是一种4小时，96孔夹心ELISA，用于定量测定人血清和血浆（EDTA，肝素，柠檬酸盐）样品中的MDA-oxLDL加合物。oxldl分析采用基于人血清的标准品，以确保对生物学上可靠的数据进行测量。
MDA-oxLDL ELISA试剂盒是一种夹心酶免疫测定法，用于定量测定血清和血浆（EDTA，肝素，柠檬酸盐）样品中的人MDA-oxLDL加合物。
下图说明了MDA-oxLDL夹心ELISA的原理：
捕获抗体： 小鼠抗人MDA-oxLDL 单克隆抗体
检测抗体：小鼠抗人MDA-oxLDL单克隆抗体，HRP标记
靶抗原： MDA-oxLDL
一步，将测定缓冲液和标准品/对照/样品移液到微量滴定条的孔中，这些孔预先用单克隆小鼠抗人MDA-oxLDL抗体包被。存在于标准品/对照/样品中的MDA-oxLDL被孔中的预包被抗体捕获。在洗涤步骤中，去除所有非特异性未结合的材料。在第二步中，将缀合物（单克隆小鼠抗人MDA-oxLDL-HRP）吸取到孔中，并形成与MDA-oxLDL夹在板上的夹心抗体的三明治。在另一个洗涤步骤之后，将底物（TMB，四甲基联苯胺）吸移到孔中。底物的酶催化颜色变化与MDA-oxLDL的量成正比。使用标准的微量滴定板读数器可以检测到这种颜色变化。使用从标准品获得的值，生成吸光度（光密度，在450 nm处的OD）与标准浓度的剂量响应曲线。直接从剂量响应曲线确定样品中MDA-oxLDL的浓度。
下图显示了人oxldl ELISA试剂盒的典型标准曲线。
内容 | 描述 | 数量 |
盘子 | 小鼠单克隆抗人MDA-oxLDL抗体预包被的微量滴定条，位于条带支架中，包装在带干燥剂的铝袋中 | 12 x 8测试 |
洗车场 | 浓缩洗涤缓冲液20倍，自然盖 | 1 x 50毫升 |
ASYBUF | 分析缓冲液，红色盖帽，准备使用 | 1 x 13毫升 |
性病 | 标准1-6（0; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10μg/ ml），人血清中的MDA-oxLDL，白色盖，冻干 | 6瓶 |
CTRL键 | 对照，白帽子，冻干的，准确的浓度，见标签 | 1个小瓶 |
康杰 | 偶联物（小鼠抗人MDA-oxLDL单克隆抗体-HRP），琥珀色，准备使用 | 1 x 13毫升 |
潜艇 | 基材（TMB解决方案），蓝盖，可以使用 | 1 x 13毫升 |
停 | 停止溶液，盖上白帽，准备使用 | 1 x 7毫升 |
储存说明： MDA-oxLDL ELISA试剂盒中的所有试剂在4°C稳定，直到每种试剂标签上注明的有效期。
使用说明
血清，EDTA血浆，肝素血浆，柠檬酸盐血浆适用于该oxldl ELISA试剂盒。研究期间请勿更改样品类型。我们建议对所有样品，标准品和质控品进行重复测量。列出的样品收集和储存条件旨在作为一般准则。
使用EDTA，肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂，在标准化血清分离管（SST）或标准化血液采集管中收集静脉血样。对于血清样品，让样品在室温下凝结30分钟。根据试管制造商的使用说明离心分离。立即测定采集的样品，或等分试样并保存在-25°C或更低的温度下。脂血或溶血的样品可能会产生错误的结果。样品可以经历至少四个冻融循环。
1。 | 使WASHBUF浓缩液达到室温。缓冲液浓缩物中的晶体将在室温（18-26°C）下溶解。 |
2。 | 将WASHBUF浓缩液按1:20的比例稀释，例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸馏水或去离子水。进行测定时仅使用稀释的WASHBUF。 |
稀释的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以稳定长达一个月。
1。 | 吸取150 µl蒸馏水或去离子水到每个标准（STD）和对照（CTRL）小瓶中。准确的浓度印在每个样品瓶的标签上。 |
2。 | 在室温（18-26°C）下放置15分钟。轻轻涡旋。 |
重构的STD和CTRL在-25°C或更低的温度下稳定，直到标签上标明的失效日期为止。STD和CTRL在四个冻融循环中保持稳定。
将样品置于室温并轻轻混合样品，以确保样品均匀。我们建议对所有样品进行重复测量。
OD值超出标准范围的高点的样品可以稀释STD1（标准品1）或oxLDL阴性人类血清。建议稀释度高为1:10。
在开始测定之前，请阅读整个方案。
1。 | 使样品和试剂达到室温（18-26°C）。 |
2。 | 在协议表上标记STD / CTRL / SAMPLE（标准/对照/样品）的位置。 |
3。 | 从铝袋中取出微量滴定条。将未使用的干燥剂带在4°C的铝袋中存放。胶条在标签上标明的有效期限之前都是稳定的。 |
4。 | 向每个孔中加入100μlASYBUF（测定缓冲液）。 |
5， | 一式两份加入20μlSTD / CTRL / SAMPLE到各自的孔中，轻轻旋转。 |
6。 | 盖紧条带，在室温（18-26°C）下孵育90分钟。 |
7。 | 用300μl稀释的WASHBUF（洗涤缓冲液）吸取并洗涤孔5次。用力将纸巾用纸巾轻轻拍打以取出剩余的WASHBUF。 |
8。 | 向每个孔中加入100μlCONJ（结合物）。 |
9。 | 盖紧条带，在室温（18-26°C）下孵育90分钟。 |
10。 | 用300μl稀释的WASHBUF抽吸并洗孔5次。用力在一块纸巾上用力敲打盘子，以去除剩余的WASHBUF。 |
11。 | 在每个孔中加入100μlSUB（底物）。 |
12 | 在黑暗中于室温（18-26°C）孵育30分钟。 |
13 | 向每个孔中添加50μlSTOP（终止溶液），轻轻旋转。 |
14。 | 如果可用，立即在参考630 nm的450 nm处测量吸光度。 |
使用450 nm波长（参考波长630 nm）在读板器上读取所有孔的光密度（OD）。使用能够生成四参数对数（4-PL）拟合的市售软件从标准品的吸光度读数构建标准曲线。或者，将标样在x轴上的浓度相对于每种标样在y轴上的平均吸光度作图，并通过图中的点绘制拟合曲线。除4-PL以外的曲线拟合算法尚未得到验证，用户需要对其进行评估。
计算样品的终浓度时，必须考虑各自的稀释系数。
套件随附的质量控制（QC）协议显示了生产日期每个批次终版本QC的结果。客户获得的OD数据可能会因各种影响和/或由于保质期内信号强度的正常下降而有所不同。但是，只要浓度高的STD的OD为1.0或更高且CTRL的值在范围内（目标范围，请参见标签），这就不会影响结果的有效性。
背景与治疗领域
氧化的低密度脂蛋白（oxLDLs）在动脉粥样硬化和冠状动脉疾病的进展中起重要作用。低密度脂蛋白（LDL）是血浆胆固醇的主要载体，由疏水性核心以及极性脂质和载脂蛋白B（ApoB）的表面单层组成。氧化应激和随后形成的自由基导致ApoB的过氧化。丙二醛（MDA）已被确定为LDL的主要脂质过氧化产物之一，因此在LDL氧化中起着重要作用。
Biomedica MDA oxLDL ELISA特异性检测人血清和血浆中MDA修饰的ApoB。
心血管疾病
