RNA-DNA STAT 60说明书
从同一样品中分离总RNA/mRNA和DNA的两种单提取试剂
目录号编号TL-4100 仅供fN.
RNA/DNA分离和RNA-DNA STAT 60的整个过程可以在90 min内完成。这些是从同一样品中提取RNA和DNA的有效方法。未降解RNA和DNA的回收 比任何其他等化方法大30-150%。
应用
RNA-DNA STAT 60分离的总RNA/DNA为 用于Northern和Southern分析的是，斑点杂交，poly A + 选择，体外反式ltio n，RNase保护分析，分子克隆，以及来自人，动物和植物的组织的polyme rase链式反应，没有任何额外的RNase/DNase处理。这些简单的单一试剂是我们的一大优势。使用本品时，RNA/DNA的回收效率较高 从小的生物样本(biop sies etc.)中分离RNA/DNA。
RNA STAT-60和DNA STAT-60
准备：即用型。
储存：2-8 ℃冷藏。
稳定性：参见la bel上的失效日期。
氯方（ACS级）、异丙醇（ACS级）和乙醇（ACS级）。
通过RNA-DNA STAT 60方法分离RNA/DNA包括以下步骤：
（1 ml/50-100 mg组织，或5-10 xI0 6ce lls）
4 . RNA Was h: 75% ethanol
除非另有说明，否则该程序在室温下进行。
Homogenize t iss ue samples in the RNA ST AT-60 (1ml
/根据50-IOOmg组织），置于玻璃-聚四氟乙烯或Polytron匀浆器中。 样品 体积 应 不 过量 所用RNA ST AT-60体积的l0% 用于均质化。
细胞 生长的 in 单眼 a重新裂解 凹凸的 in 通过加入RNA STAT-6 QTM(l ml/3.5 cm2 petri dis h)并通过细胞溶解物的培养皿。 I 0 - 20 时间 用吸管粗暴吸管。悬浮生长的细胞 是 沉淀，然后在 RNA ST AT-60TM ( l ml/ 5-JO x 106 ce lls） by 重复的 移液。 洗涤 皮肤 加入前 of 的 RNA STAT-6 QTM should be 避免 增加了RNA降解的可能性。
使均质化， 存储 的 匀浆 te 针对 室温下5 min，使其*解离 of 核蛋白 复合物。 下一步，添加 0.2 ml 氯方 依据 ml of 的 RNA STAT-60™。 盖上样品盖，用力摇晃 针对 1 5 秒 o nds和 le t检验 it s ta nd at 房间 温度 针对 2-3 分钟。离心机 的 匀浆 at 12,000g （大值） 针对 15分钟 at 4° C.以下 离心 第e次匀浆 半配对 进入 二 阶段： a 下限 红酚氯方相和无色上层 水相。RNA在水相中保持着不透明的状态，而DNA和 蛋白质类 是 in 的 在三相和有机相中。溶液的体积 水 相 约为匀浆使用的RNA STAT-60TM体积的60%。
传输 的 曲菌的 相 to a fres h 试管。 添加 0.5 ml异丙醇/ml或用于匀浆的RNA STAT-60TM 和 混合。 储存 样品 at 室温下离心5-10 min at 1200 0g（大），10 min，4 °C。RNA沉淀（离心离子前不可见），因为在管底部有白色沉淀。
除去上清液，清洗RNA沉淀 一次 含75%乙醇 l by 涡旋 和 后续 以7.500g（大值）离心5 min 4° C. 添加 at 病变 I ml 75%乙醇/ml 的 RNA STAT-60TM 使用 对于初始均质化。
程序结束时，短暂干燥RNA沉淀(5-10 min)。重要的是不要使RNA沉淀*干燥，因为它将大大 减少 it 溶解度。 请勿使用 用于干燥的Speed-Vac。溶解RNA 水或(l mM)EDTA中沉淀。pH 7。或0.5%SDS溶液。涡旋或使团块通过 a 很少 次 通过 a 移液器吸头。可能需要在55-60 ℃下孵育10-15 min以溶解RNA。经焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的无RNase溶液 be 使用 对于RNA的如此轻浮。
总RNA的预期yie ld：
µg .
总RNA的终制备液不含DNA 和蛋白质，260/280比值 > 1.8。
I. 对于少量细胞或组织(1-10 mg)的RNA同分异构体：将样品在0.8 mL tl1e RNA ST AT-6QTM中匀浆，将匀浆转移至Eppendorf管中，并遵循isola ti on方案。RNA沉淀应在-20 ℃下进行30 min的离子除外。需要添加载体r，如糖原。
RNA STAT-60TM co ntains the poiso n(pheno l)and the irritant(guan idiniu m).可能致命。当使用RNA STAT-6 QTM时，使用手套和护目镜（护罩、护目镜）。请勿接触皮肤或衣物。避免吸入蒸汽。同时阅读药瓶上的警告说明。请勿将RNA STAT-60TM暴露于强烈的酸性溶液中。
DNA反向提取
取出后 的 水 层包含 RNA， 添加 800 μL DNA STAT-60试剂/ml RNAzol。RNAzol B或RNA STAT-60 使用 针对 的 初始 均质化离子。添加 0.2 mL氯芬/ml DNA STAT-60、 奶昔 用力静置15秒，然后在室温下静置 温度 针对 2-3 min。在4 ℃下以2000 g（小值）-12000 g（大值）离心匀浆15 min。 渗出性 同源nate分为2个相： a 下部器官ic 相和上层水相。DNA保留在水相中，而蛋白质处于间期和有机相中。
转换器 的 水溶液 相 to a 新鲜的 管 和 混合 含异丙醇。每毫升加入0.5 mL异丙醇 of 的 使用的DNA STAT-60 针对 均质化。 Sto re 样品s at -20°C 30 min，离心机 12,000g （大值） 针对 LO 分钟 4 °C下。DNA 沉淀 翅 小 澄清 to 白色 微丸 在底部 of 的 试管。 委托方 小样本， 添加 of a 可能需要载体(g lycoge n)d。
除去上清液，用75%乙醇涡旋清洗DNA沉淀一次，随后在4 ℃下以7,500g（多）离心5 min。按照1 mL 75%乙醇 ml of 的 DNA STAT-60 使用 针对 的 初始 同质尼扎离子。
在程序结束时，通过风干(5-10 min)干燥简单的DNA团块很重要，不要使团块过度干燥，因为它将大大降低其如此的柔韧性。将DNA沉淀溶于水或1 mm edta(pH 8.Vo rtex)中或通过移液器吸头使沉淀通过几次。可能需要在55-60 ℃下孵育10-15分钟以溶解DNA样品。
特殊处理注意事项
DNA STAT-60™含有刺激物(g ua nidinium) 并且可能是致命的。当与 DNA STAT-60 使用 手套和护目镜（护罩， 安全性 护目镜）。请勿 得到 皮肤或衣服上。避免吸入蒸汽。阅读瓶上的警告说明。请勿将DNA STAT-60暴露于酸性环境中。
I. Chomczynks I. P.和 Sacchi, 1987. 单步 方法 的RNA Iso化通过酸性胍硫氰酸铵-苯酚l氯方提取。生物技术8:14 8-1 49。
如有要求，可提供更多信息。
