advancedbiomatrix SpongeCol说明书
目录 #5135
SpongeCol ®是一种 I 型胶原蛋白海绵，具有互穿的柱状孔结构。SpongeCol ®为组织工程应用中的细胞附着、生长和迁移提供了更大的表面积。
SpongeCol ® 是一种具有互穿、柱状多孔结构结构的胶原蛋白海绵。 SpongeCol ® 含有*的柱状多孔网络，允许细胞和营养物质*通过互穿孔流动，并为细胞附着、生长和迁移提供更大的表面积。
SpongeCol ® 由高度纯化的 I 型胶原蛋白组成，最能支持细胞的附着、增殖和功能。胶原蛋白轻微交联，可提高短期和长期组织培养的机械强度和耐久性，但长期仍可生物降解。孔的直径范围为 100 至 400 微米，平均直径约为 200 微米。胶原盘的直径约为 4 毫米或 21 毫米，厚 1.5 毫米。海绵圆盘适合 96 孔（4 毫米圆盘）或 12 孔（21 毫米圆盘）培养板或用于流动灌注的卫生鲁尔接头。每个包装包含 25 (4 mm) 或 5 (21 mm) 胶原蛋白海绵盘。
本产品经过最终灭菌，即可使用。
| 参数、测试和方法 | SpongeCol ® #5135 |
| 圆盘直径 | 4毫米或21毫米 |
| 包装尺寸 | 25 或 5 个海绵/包 |
| 圆盘厚度 | 1.5 毫米 |
| 毛孔大小 | 直径约 200 微米，范围 100-400 微米 |
| 内毒素 - 鲎 | < 1.0 欧盟/毫升 |
| 贮存温度 | 室内温度 |
| 保质期 | 自收到之日起至少 6 个月 |
| 灭菌方法 | 辐照 |
| 无菌 - USP 修改 | 没有增长 |
| 胶原蛋白来源 | 纯化的 I 型胶原蛋白 |
| 胶原蛋白纯度 - 银染 | > 99% |
A. 准备和播种：
注意：细胞附着在海绵上通常是组织培养中最关键的一步。温度、pH、气体交换和细胞浓度会影响附着速率和效率。接种率取决于培养的细胞类型。
在层流工作站中无菌地从包装中取出海绵盘。
使用无菌仪器将海绵小心地放入 12 孔（21 毫米海绵）或 96 孔（4 毫米海绵）组织培养板的孔中。转移时小心不要损坏海绵。建议使用未经处理的组织培养塑料器皿。
注意：组织包被的塑料器皿可能需要涂有琼脂糖，以防止细胞附着在塑料上而不是海绵上。
以所需浓度（1×10 4 – 1×10 5 个 细胞/mL）悬浮细胞，并在放置在孔中的海绵顶部分配足够体积的细胞溶液。注意：另一种方法是将细胞悬浮在中和的胶原蛋白溶液中（例如 PureCol® I 型胶原蛋白目录 #5005-100ML 或 PureCol® EZ Gel 目录 #5074-35ML）。在放置在井中的海绵顶部分配胶原蛋白/细胞溶液。
转移到 37ºC 培养箱中约 1 – 2 小时，以允许初始细胞附着。
1 – 2 小时后，从培养箱中取出培养板并检查细胞附着情况。可能需要额外的测试来优化细胞附着在海绵上的时间。检查细胞的形态。细胞粘附和扩散将决定附着时间。
一旦细胞充分附着在海绵上，增加每个孔的最终体积以*覆盖并为培养系统提供足够的培养基。
B. 更换媒体：
在初始播种后 12 到 24 小时更换培养基。变化的频率将取决于细胞类型、细胞附着效率、培养物可利用的培养基营养物的 pH（保持在 pH 7.0 至 7.4）利用率。与 2D 培养系统相比，可能需要更频繁地更换培养基。
C. 细胞的收获：
注意：蛋白酶消化是从海绵中释放细胞的标准方法。细胞与胶原海绵的附着强度因细胞系而异。酶浓度和消化时间将根据酶的活性和细胞的汇合度而变化。胶原酶和/或胰蛋白酶可能是优选的方法。
用 EDTA-PBS 清洗海绵可能有助于蛋白酶消化。添加足够的体积以覆盖海绵。
从井中吸出 EDTA-PBS 溶液。
向孔中加入足够的解离溶液以*覆盖海绵。
转移到 37ºC 培养箱中。定期检查细胞脱落是否有细胞脱落。
一旦细胞*分离，取出细胞并分配到离心管中。
根据需要离心细胞。
