上海起发jembio T4 DNA聚合酶说明书
T4 DNA聚合酶 来源：大肠杆菌噬菌体T4描述：• 表现出5'->3' 聚合酶和3'->5' 核酸外切酶活性(1, 2)。• 将标记的核苷酸添加到 DNA 片段的凹陷 3' 末端。• 聚合酶需要存在单链 DNA 模板和引物。• 核酸外切酶比 DNA 聚合酶 I 中的更强，对单链 DNA 的活性高于对双链 DNA 的活性。• 超纯重组酶。• 核酸外切酶活性可用于从双链 DNA 的 3' 端去除一个或几个核苷酸。• 酶适用于：o 去除 3' 突出端以形成平端 (3,4)o 5' 填充以形成平端 (3,4)o 使用替代合成进行探针标记 (3,4)o 单链缺失亚克隆 (5)o 定点诱变中的第二链合成 (6)单位定义：一个单位是在 37oC 下 30 分钟内催化 10 nmoles 总核苷酸掺入酸不溶性产物的酶量。储存条件：储存于 –20oC。储存缓冲液：20 mM 磷酸钾 (pH 6.5)、5 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。测定条件：67 mM Tris-HCl（22oC 时 pH 8.8）、6.7 mM MgCl2、10 mM 二硫苏糖醇、16.6 mM 硫酸铵、6.7 µM EDTA、20 µg 牛血清白蛋白、45 µg 活化小牛胸腺 DNA 和 0.033 mM dCTP 、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP。在 100 µl (1) 的反应体积中，在 37oC 下孵育 30 分钟。质量控制：所有制剂都经过了污染核酸内切酶活性测试。参考：1. Goulian, M.、Lucas, ZJ 和 Kornberg, A. (1968) J. Biol。化学。243、627-638。2. Lehman, IR (1981) Enzymes 14, 51-65。3. Tabor, S. and Struhl, K (1989) in Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, FM, et al., eds) pp. 3.5.10-3.5.12, John Wiley&Sons, New York。4. Sambrook, J.、Fritsch, EF 和 Maniatis, T. (1989) 分子克隆：实验室手册，第二版，第 5.44-5.47 页，冷泉港。5. Dale, R.、McClure, B. 和 Houchins, J., (1985) Plasmid 13, 31-40。6. Kunkel, TA, Roberts, JD 和 Zakour, RA (1987) Methods Enzymol.154, 367-382。 T4 DNA 聚合酶是嗜中性聚合酶，表现出非常强的 3'->5' 核酸外切酶活性。
