arthusbio IK00301s说明书
S- Adenosyl-L-Homocysteine (SAH) ELISA Kit
(For Plasma, Serum or Tissue Samples)
目录号IK00301s
包装尺寸96测试
检测范围31.25 nM-1000 nM
目标详细信息
甲硫氨酸是一种具有硫甲基的氨基酸，通过甲硫氨酸腺苷转移酶（EC 2.5.1.6）与ATP一起转化为S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。SAM是50多种生物活性物质（如DNA、RNA、蛋白质、磷脂、激素和神经递质等）的甲基供体。甲基在甲基转移酶作用下从SAM转移后，形成S-腺苷高半胱氨酸，去除腺苷后进一步代谢为同型半胱氨酸（Hcy）。同型半胱氨酸通过N5甲基四氢叶酸甲基转移酶（EC1.1.1.68）和辅酶维生素B12催化途径从N5甲基四氢叶酸接受甲硫氨酸代谢为甲硫氨酸。这是蛋氨酸循环。
甲基化指数定义为SAM和SAH的比率。甲基化指数是甲基化状态和甲基化的更好标记
能力。
SAH和Hey连接了向关键生物分子提供甲基乙氧基和从N-5甲基四氢叶酸中回收甲基乙氧基的过程。蛛网膜下腔出血的水平将决定或反映蛋氨酸循环是否正常。因此，找到一种更好地量化它们的方法具有重要的实际意义。SAH升高可导致血管内皮细胞损伤，这与基因组甲基化水平有关。蛛网膜下腔出血可能是动脉粥样硬化的潜在生物标志物。该免疫分析试剂盒用于测量可溶性样本中的SAH水平。
测定原理
这种直接竞争ELISA（酶联免疫吸附试验）旨在测量样品中S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAH）的水平。将与大分子共轭的SAH固定在
微量滴定板。将标准品和样品移液到孔中，然后添加抗SAH的HRP结合抗体。样品或标准品中的游离SAH分子与微滴度板表面上的固定化SAH竞争抗体的结合位点。丢弃混合溶液并清洗每个孔后，添加TMB基质溶液。基质溶液在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下变蓝，添加停止溶液（酸）后变黄。颜色与样品（或标准品）中的SAH量成反比。使用微板分光光度计在450nm处测量剩余溶液（OD450）的光密度。可以通过标准生成的标准曲线计算样本中的SAH水平。
样品收集和储存
1、样品采集必须在4°C下进行。必要时，通过离心去除沉淀，并尽快测试样品或将其储存在-20°C或以下。避免重复冻融循环。
2.避免样品中的NaN3，因为它会使辣根过氧化物酶（HRP）失活。
3、试剂盒用于血浆、血清或组织/细胞匀浆样品。
程序
1、将所有试剂重新加热至室温，并充分混合。取出适当数量的井，将剩余的井放回Ziploc。密封Ziploc并将其储存在-20°C。
2、向每个孔中加入50ul样品稀释剂（空白孔）、标准品和样品。
3、制备HRP结合抗体溶液：用HRP抗体稀释液按1:500稀释HRP抗体，一周内用完。如果一周后使用，请在需要时准备。充分混合并储存在黑暗中。
4、向每个孔中加入50ul HRP结合抗体，空白孔除外。
5、将平板置于振荡器上，摇动一段时间，使试剂混合，然后用微孔板封闭剂密封平板。将平板在37°C下培养1小时。
6、小心剥离密封剂，并将剩余溶液丢弃在孔中。在每个孔中添加至少300ul洗涤液，并保持该状态30秒，然后去除洗涤液。重复这些步骤3次以完成清洗过程。或者改用自动清洗机。
7、向每个孔中添加TMB基质和100ul混合基质。轻轻摇晃并密封盘子。将培养板在37°C下无光培养15分钟。
8、在反应结束时加入50ul停止溶液。
9.在15分钟内测量每个孔在450 nm波长下的吸光度。根据空白井设置零。
数据处理
始终通过从测试孔的吸光度中减去空白孔450 nm（OD450）处的吸光度来清除背景。每个孔（标准或样品）的吸收率等于A/Aso，A是标准孔或样品孔的平均吸光度，Aso是S0标准孔的平均吸光度。创建标准曲线：构建标准
通过绘制每个标准品在y轴上的结合率与
其浓度在x轴上的对数。使用二次多项式曲线拟合数据（r>0.99）。通过将样品的结合速率代入标准曲线方程，可以计算样品的SAH水平。如果样品已稀释，则乘以稀释程度。
笔记
1、使用未重新加热的试剂和样品或环境温度低于20°C可能导致OD450值降低。
2、额外的干燥后洗涤可能会对结果产生负面影响，例如标准曲线和重复性较差。为了避免这种情况，请在清洗后立即执行下一步。
3、充分混合溶液并*清洗，因为这些程序会影响分析。
4、用微板封闭剂密封板，孵育板时避光。
5、推荐标准和样品的重复井，建议标准曲线ftting采用二次多项式（>0.99）。质控瓶的检测浓度应在检测范围内。
6、浓缩洗涤液可能结晶。加热，使盐在稀释前*溶解。
7、微孔板密封剂应一次性使用，以避免交叉污染。
8、基板应避光。
9、停止溶液为稀硫酸。避免直接接触皮肤和其他物品。
存储和有效日期
储存条件：除HRP基质和停止溶液储存在2-8°C外，所有其他成分和板条均可冷冻储存。
有效期：自装运之日起冰箱储存约6个月。如果不打算很快使用，用户可以将分析板、HRP抗SAM抗体、标准品、HRP抗体和样品稀释液放在冷冻柜中，以获得更长的储存时间或/或更好的结果。
