ezbioscience EZB-exo2说明书

Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM) 

产品概述

介绍

EZBioscience®外泌体分离试剂盒（来自NTA/TEM细胞培养基）提供了一种简单、可靠和快速的方法，用于从细胞培养基、尿液、支气管肺泡灌洗液（BALF）、脑脊液（CSF）样品中分离高质量完整的总外泌体，而无需超速离心。

外泌体是含有RNA和蛋白质的小囊泡（30-120nm），由培养物中的各种类型的细胞分泌，并在体液（如血液，唾液，尿液和母乳）中大量存在。据报道，外泌体作为细胞间信使发挥作用，在特定细胞之间传递效应物或信号大分子;然而，它们的形成、货物的组成以及它们所涉及的生物学途径尚不清楚。

外泌体分离试剂盒（来自细胞培养基）提供了一种简单可靠的方法，可以从细胞培养基样品中浓缩完整的外泌体。通过捆绑水分子，外泌体沉淀试剂迫使溶解性较低的组分（即外泌体）从溶液中取出，从而可以通过短暂且相对低速的离心收集它们。然后通过纯化柱（0.22μm）纯化重悬的外泌体。

之后，外泌体可用于RNA纯化（用于RNA测序、RNA芯片、RT-qPCR）、蛋白质提取、粒度检测和电子显微镜等。

协议

一般准则

a） 为确保分离的外泌体源自目标细胞，请用外泌体耗尽胎牛血清（FBS）或无血清培养基培养细胞，因为正常的FBS含有ji高水平的外泌体，会污染细胞来源的外泌体。如果您无法获得外泌体耗尽的FBS，某些细胞系可以在没有FBS的培养基中生长长达12小时。

b） 不建议使用外泌体沉淀试剂 （EPR） 从其他种类的样品中分离外泌体。如果要从血浆中分离完整的外泌体，请使用全外泌体分离（从血浆中分离）试剂。

准备样品

1.收获5~20ml细胞培养基（或尿液，支气管肺泡灌洗液，脑脊液）。

2.将血浆样品在3000 × g 在4°C下离心10分钟以除去细胞和碎片。

3.将含有无细胞培养基的上清液转移到新管中，而不会干扰沉淀。

分离外泌体

1.将所需体积的无细胞培养基转移到新管中，并加入1/4体积的外泌体沉淀试剂（EPR）。

文化媒体	试剂
5毫升	1.25毫升
20毫升	5毫升

2.通过涡旋或倒置试管将培养基/试剂混合物充分混合，直到溶液均匀。将样品在 2 ~ 8°C 下孵育过夜。

3.孵育后，将样品在4°C下以10000×g离心30分钟。

4.通过移液小心地吸出上清液并丢弃上清液。外泌体包含在管底部的沉淀中（在大多数情况下不可见）。

重悬外泌体

1.向沉淀中加入1× PBS或类似的缓冲液，上下涡旋或移液以重悬外泌体。

启动文化媒体卷	重悬体积
1毫升	30微升
10毫升	60微升

2.一旦沉淀重悬，外泌体就可以进行下游分析或通过亲和方法进一步纯化。