Phusion高保真聚合酶中的战斗机

 如果PCR产物需要进行后继的克隆表达研究，需要进行高保真度PCR以减少PCR过程中出错而造成的点突变，我们通常会选择高保真DNA聚合酶。一般的高保真DNA聚合酶因为本身的校验功能注定了效率低，产量低，条带弱，时间慢。的高保真酶Pfu的效率大概只有Taq酶的1//5。常有人感叹“又贵又不好用（指产量低）”！为了提率，有些公司又推出了混合酶，将Taq与带校验功能的DNA聚合酶混合，中庸的结果就是效率不如Taq酶，保真度不如Pfu，一般就比Taq高3倍，价格还不便宜。

Finnzymes公司独辟蹊径，将双链DNA结合蛋白（紫色）与一种新型的具有校对功能的类热球菌酶（绿色）融合，形成了一种*的高性能聚合酶——Phusion® DNA聚合酶。这下，两个问题都解决了。

 
图1. Phusion DNA聚合酶的*结构

快人一步

由于这项*的融合技术，Phusion DNA聚合酶合成DNA的速度和准确度是以往任何单一酶都难以企及，即使是zui复杂的模板，也能准确、快速地完成反应。与其他酶相比，Phusion DNA聚合酶在每次与DNA的结合反应中都能够掺入更多的核苷酸，其高处理能力大大缩短了延伸步骤的时间，进而加快了整个反应的进行。它的延伸速度是Pfu酶的10倍，比Taq酶还要快一倍，达到15-30秒/kb。如果你还想更快，可以选择Phusion® Flash快速高保真聚合酶，每kb 碱基的延伸时间仅为15 秒或更少，反应时间zui短，酶的用量显著低于其他常见的聚合酶。Phusion DNA聚合酶的高速度和率使得它能在zui短时间内获得大量产物。

Finnzymes曾做过实验，从Thermus sp.基因组文库中随机挑选16个克隆，并用3种不同的耐热DNA聚合酶进行扩增。结果显示，Phusion® DNA聚合酶具有强劲的性能和速度，它能够成功扩增出随机挑选的16个片段中的15个（94%），并且产量很高。而Pfu DNA聚合酶的成功率仅为56%，Taq DNA聚合酶成功率也才62%，二者的产量明显低于Phusion® DNA聚合酶。而且从图中可以看出，Phusion® DNA聚合酶的延伸时间和酶用量均显著低于Pfu酶，与Taq相当，但产量更高。如此强劲的性能，无出其右。

 
图2. Phusion DNA 聚合酶集超高保真度、快速和强劲的性能于一体

节约时间，节约用量

由于其结构*，Phusion DNA聚合酶的效率非常高。在PCR反应中，该酶的用量显著低于其他常见的聚合酶。研究人员曾使用3种不同的DNA聚合酶扩增一个长为3.8kb的人β球蛋白基因。使用Phusion DNA聚合酶不但可成功扩增出此3.8kb的基因组片段，且退火和延长步骤仅需1分钟，明显快于其他两种聚合酶。一个单位的Phusion DNA聚合酶所获得的产物高于5个单位的Pfu DNA聚合酶的产量，比2.5个单位改良的Pfu的产量也高得多。

图3. 用更少的酶 —— 获得更多的产物

适用性强

此外，Phusion DNA聚合酶能够zui大限度地容忍各种PCR抑制剂，因此只需要很少的优化步骤就可以进行非常的扩增。这个特点也催生了的直接PCR。对于血液、组织等多种样品，甚至是FFPE样品，无需提取DNA，即可直接开展高保真PCR扩增。

Phusion DNA聚合酶有多个版本可供选择。 除了上面提到的Phusion Flash，还有Phusion热启动II高保真DNA聚合酶，其高度特异性和*聚合能力决定了它是热启动PCR的理想选择。几种酶的特点和产品形式如下：

价格便宜 选择多样

Phusion DNA聚合酶性能如此强劲，而价格却相当亲民。以Phusion高保真PCR 试剂盒（含除模板引物外其他所需试剂）为例，目录价只需555元即可进行125次反应（每次20μl ），单次反应成本才4.44元，1878 元即可有500次反应，简直太给力了！
Phusion DNA聚合酶（含酶，缓冲液，Mg离子，DMSO）只要879元/100U，足够做100次50ul反应。要知道PfuUltra目录价100U的单酶（40次反应）也不止1900啊！

Phusion DNA聚合酶还提供其他多种选择，热启动的高保真单酶（1067元/100U），还有针对GC含量丰富模板，或者特别含HF缓冲液的预混合酶MasterMix系列产品。

更少出错

更重要的是，Phusion DNA聚合酶是目前市场上保真度zui高的热稳定性聚合酶。使用改良的lacI方法检测，Phusion DNA聚合酶的错配率比Taq DNA聚合酶低约50倍, 比Pfu DNA聚合酶低6倍，是高保真PCR的理想选择。对于研究基因功能，需要从事定点突变，基因克隆和表达分析等工作来说，Phusion DNA聚合酶无疑是更好的选择。

Taq酶出错几率较高，且平均扩增长度不超过3.5kb。而Phusion DNA聚合酶则可扩增10kb以上（<20kb）的超长片段，保真度高不容易出错，再加上扩增速度比普通高保真酶快得多，故使用Phusion DNA聚合酶可以有效节约很多时间。